简述海藻提取dna过程中应注意的问题。

DNA提取的完整步骤:

1.取新鲜或冷冻样品的肌肉组织100ul-200ul或0.05g经95%ALC保存的样品组织。2.尽可能多的切取组织，分别放入1.5ml离心管中。

3.加入450微升裂解缓冲液(10毫米Tris-HCl ph 8.0；100毫米EDTA，pH8.0)

4.每管加入10% SDS 50-100 ul(70-80不定)(1-2%)，再加入2.5-5ul(3ul)蛋白酶K (20mg/ml)。

最终浓度为100ug/ml，混合物在55℃下搅拌均匀3小时至过夜(期间试管反转数次)。5.向样品中加入150ul NaCl(盐析)，在8000rpm的室温下离心20min，除去沉淀，然后加入到上清液中。

加入同体积(500ul)预冷的异丙醇(沉淀的DNA)，混匀，20℃处理30分钟，以65438±04000 rpm离心65438±00分钟，除去上清液。用70%ALC洗涤沉淀物，离心除去ALC。室温下挥发ALC5-10min，加入500 ul Te和10 ul RNase(终浓度4mg/ul)，即2.5ul. 37℃ 30min或65℃ 15min。

6.加入等体积的酸溶液(从DNA中提取蛋白质)并缓慢来回转动离心管65438±00分钟，以13000-15000rpm离心。

10分钟.用移液管(大尖头)小心取出上相，放入另一个干净的离心管中，不要碰到两相之间的白色蛋白层(视情况重复操作几次)。7.加入等体积的苯酚:氯仿(提取苯酚)(1: 1)，轻轻摇匀，慢慢倒置混匀，10min 13000-15000 rpm离心。

5-10分钟，取上清液于干净的离心管中。

8.加入等体积的氯仿(氯仿:异戊醇(防止氯仿挥发)= 24: 1)，轻轻摇匀，慢慢倒置，混匀。

以13000-15000转/分的速度离心5-10分钟。向上清液中加入1/10体积的2M NaCl和等体积的储存在-20℃的无水乙醇(或等体积的异丙醇)(沉淀的DNA)，沉淀DNA 10分钟，以13000 rpm离心5min，除去上清液，加入100-10。45℃烘干15-30分钟，沿管壁用双蒸水洗涤(TE含量视DNA沉淀量而定，在80-250ul之间)，溶解12-24 h，储存于-20℃备用。

注意事项:

1.裂解液要预热，抑制脱氧核糖核酸酶，加速蛋白质变性，促进DNA溶解。

2、苯酚必须碱平衡。苯酚具有很强的腐蚀性，溅到皮肤、黏膜、眼睛上会造成伤害，要注意防护。氯仿易燃易爆易挥发，有神经毒性作用，操作时应注意防护。

3.每个操作步骤都要温和，尽量减少DNA的人为降解。

4、取上清液时，不宜贪多，以防非核酸成分干扰。

5、异丙醇、乙醇、NaAc、KAc等。应预冷以减少DNA的降解，促进DNA和蛋白质的相分离和DNA沉淀。