家庭如何做植物组织培养？

植物的组织培养没有最基本的条件和物品是不可能的，合理利用当时一些最简单的器具也不是不可能的。

第一，最必需的物品

1，1家用压力锅，最好大一点，装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒。

2.有1接种箱(无菌箱)，需要自己做，用一些木板，一块玻璃，两尺布。用于接种和转移。

3.1医用天平最好是500g，或者更小，主要用于琼脂、糖等物品的称量。

4.买不锈钢锅或者铝锅(煮汤煮面的那种)。用于蒸煮培养基。

5.用于搅拌和重新包装培养基的勺子用于蒸煮和重新包装培养基。

6、若干个培养瓶，

7.许多棉花、纱布和线被用来制作棉塞，棉塞被用来制作瓶塞。需要注意的是，棉花要用普通棉衣，不要用医院用的脱脂棉，这样容易磨损堵塞，污染。

8.有些牛皮纸和橡皮筋是用来包瓶盖和包装纸的。

9.65，438+0酒精灯，65，438+0手术刀，若干刀片，两把镊子，一个分别装有65，438+00 ml和65，438+000 ml的量筒，65，438+0 2ml移液管和一些脱脂棉。

二、蒸馏水和碱性药物如何解决

培养基所用的水在一般人的心目中总是很重要的，其实是一种不必要的担心。用的是凉开水，干净的河水，不影响养殖效果。市场上销售的纯净水是一般培养基的理想用水。最常用的，必要的，用过的，只需要买下面这些。

1，MS培养基中大量元素(家庭或所谓袖珍组培室培养一般采用MS基础。)***5种。也可以购买市售的MS培养基。

(1)，硝酸铵

(2)硝酸钾

(3)、氯化钙

(4)硝酸镁

(5)、磷酸二氢钾

2.酒精

3.精密试纸(PH 5.4-7.0)

4、漂白粉或漂白精

5.琼脂

6.精制糖

7.福尔马林

8、高锰酸钾(可以去医院或药店买)

9.微量元素、铁盐、维生素、激素很少用。比如一些激素、维生素、药物、注射剂、片剂，含量都比较准确，你可以根据自己的需要来做比例。

家庭环境爱好者对组织培养的探讨和建议植物组织培养技术，尤其是快繁，不是只靠专业人员和专业实验室就能完成的。作为对多肉植物和组织培养有浓厚兴趣的爱好者，也可以在充分利用家庭条件的基础上，自己准备试管苗。在多肉植物的栽培过程中，我们认识到一些稀有的园艺品种，如万象、玉扇、寿衣、高雯鹰爪等。或块茎植物，如彩色橄榄和贺鲁牵牛，甚至还有行星和石栎等。，常规繁殖系数低，均可采用组织培养解决其繁殖问题，获得相当数量的种苗。组织培养也可用于种子萌发困难的植物的无菌播种，如花样年天外。在组织培养过程中，我们不仅可以对培养的植物有更深入的了解，而且对常规培养也有很大的意义。很多从事组织培养的专家，一开始并没有专攻组织培养，而是凭着兴趣和探索精神取得了辉煌的成就。关键是粉丝兴趣浓厚，观察力过人，操作细致，能够弥补非专业的缺陷，充分利用日常生活中各种可利用的资源，足以让粉丝在家庭环境中完成组织训练。同时既满足了自己的利益，又有一定的经济效益，甚至可以进行创新发明。

一、如何解决场地和基本设备:

没有一定的设备，组织培养是无法进行的。正规实验室的组织培养设备比较贵，不适合家庭消费，但是如果有办法买到便宜的实验室设备就太好了。如果拿不到实验室设备，不妨自己做一些简单的设备。

1.无菌操作的主要设备-接种箱和高压锅:

接种箱:植物组织培养的主体操作需要在相对封闭的无菌环境中进行。那么首先要营造一个封闭的环境，可以用木头、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等一些便宜的材料粘一个小的接种盒。具体参数可以在一本《食用菌栽培》上找到，模仿种蘑菇的接种盒做一个就可以了。需要注意的是，组织培养的接种盒要求密封性高，尽量避免腐朽的木材和生锈的材料。两盏灯放在盒子的顶部:一盏20w的紫外线灯和一盏20w的荧光灯。盒子的外围尽量用玻璃材质，因为便于观察，有时可以借用接种盒做培养箱，外围用玻璃材质，更便于观察和培养。

高压锅:主要用于培养基和其他材料的灭菌。医用高压灭菌器一般在实验室使用，但在家庭中，要充分利用厨房使用的高压锅。高压锅的压力比灭菌器低，但是我们适当延长杀菌时间还是可以达到很好的效果。比如对培养基灭菌40分钟(灭菌器为20分钟)，基本可以达到灭菌效果；无菌水是分次灭菌制成的，可以在高压锅里压40分钟，静置24小时后再压20分钟。

2.地点:

这对人们来说很容易。总的要求是进行组织培养的地方尽量无尘，减少空气流动，最好有一些阳光。例如，书房和写字间可用于无菌操作。

可以借用厨房准备培养基，但是使用的器皿一定要和厨具分开。一般来说，组织培养中几乎所有的化学物质对人体都是无害的，只有少数激素和消毒剂除外。有毒物质需要小心保存以避免危险。

3.辅助设备:

主要指冰箱，用来存放化学药品和培养基。天平可以是灵敏度为100克的托盘天平，甚至可以用中医的药秤代替。文化架，这个更简单。铝合金玻璃培养箱可以满足要求。如果太阳光不足，可以用日光灯补充。

4.化学试剂:

化学试剂是必不可少的，因为组织培养的核心是培养基的成分，而不是简单的无菌操作。需要购买一些用量较大的化学品，如大量元素(硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等。)，高锰酸钾，甲醛，酒精，白糖，琼脂等等。微量元素和有机化合物不需要购买，因为它们的用量很少，我们可以用蔬菜汁或马铃薯汁代替。激素是必不可少的，其称量需要分析天平的帮助，但这是家庭条件所不允许的。如果可能的话，可以用关系单位代替做母液，一次可以取一些。最好的办法是去农资店(卖农药化肥的)。他们一般卖农用激素，有的装在安瓿里，按一定比例加到培养基里。近年来，一些化工公司开始生产植物组织培养基原粉，只需称一定量的水就很方便。比如泛泰化工公司生产的ms粉，只需要称取40克，加入1升水，在微波炉中加热5分钟，相当简单。

消毒剂通常是氯化汞(剧毒)。如果不容易得到，可以用漂白粉代替。

调节pH值时，可以用家庭常用的纯碱和白醋。

5.培养容器和玻璃器皿:

组织培养的容器要求不是很高，只要玻璃颜色透明即可(钠玻璃不允许)。

我们可以去垃圾站捡一些旧果酱瓶。比较好的那瓶是阿香婆辣椒酱，我们实验室也用。瓶子的密封薄膜可以由聚丙烯塑料制成。如果很难找到，可以用锡箔纸甚至微波炉专用的方便面袋，折叠成两层，用橡皮筋固定。

其他玻璃器具，如烧杯、玻璃棒等，可以用家庭用的杯子、筷子代替；一些测量仪器，如量筒、移液管等，最好在玻璃仪器商店购买。恐怕不用花20块钱就能配置一套优秀的组培玻璃仪器。

6.其他:

还有一些用品是必须的。比如你需要买一张精密的ph试纸(5.4~7.0)，大概需要1.5元。你不需要买酒精灯。用一个带玻璃圈的墨水瓶，外加一个棉芯。最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖当灯泡。这个酒精灯很小，适合接种箱。刀子、剪刀和镊子是必要的。去花市的工具摊花10元全部搞定。注意选择较小的工具。

至于用水，蒸馏水是应该用的，但是我们家里喝的纯净水比蒸馏水纯净，所以借点饮用水就够了。我们用康师傅纯净水培养动物细胞，效果都很好，更不用说植物细胞培养了。

以上是组织培养的基本设备和试剂，主要突出其相关替代品，因为作为组织培养中的快繁，其要求相当低。我们的家庭培养不同于工厂化培养，工厂化生产组培苗要追求高增殖率，所以它的要求更加精准和标准。我们的家庭训练不需要那么精准，只要达到训练成功的目的就可以了。当然，要想提高增殖率和试管苗的质量，必须尽量靠近实验室的器具和设备，替代品总是有一定缺陷的。

(a)必要的设施和替代品

1，替代

家用冰箱可用于保存培养基母液(4℃)和需要低温保存的药物(如生物调节剂)。

高压锅:可用于培养基、无菌水、玻璃器皿等组织培养器皿的消毒灭菌。如果使用的水硬度较高，可以用冷开水消毒杀菌。避免消毒物品表面结垢。

不锈钢锅或铝锅:可用于培养基、溶解琼脂(作为水浴锅)、组织培养设备的消毒灭菌。

刷洗废油桶:可用来储存蒸馏水。

小白瓷盘:可以用来接种和装消毒液(如果放了消毒液，就不要再吃了，以免中毒)。

荧光灯:可用于组织培养中补充光源。

洗去废弃的易拉罐:可用于组织培养，代替锥形瓶和试管。

组织培养地点可以在自己的房间里进行。配制培养基和接种时，不要在家人多的时候做。如果室内已经安装了空调，将有利于一级培养、二级培养甚至幼苗过渡。

2、自制家电

(1)接种盒的制作:洁净工作台是组织培养过程中非常有价值的设备。如果用自制的接种盒代替，可以大大节约资金，有利于推广。

自制接种箱的材料可以是胶合板、纤维板、玻璃(3 mm厚)、木条(装饰房屋用的龙骨)，甚至是纸箱(箱子质量略好，如电视机的箱子)，也可以是有机玻璃。

接种盒的大小可以根据他们的家庭条件来定。太小，操作不便，但相对容易消毒，占地少；做一个大的容易操作，但是消毒工作不容易，而且占地面积大。一般来说，长70厘米，宽45厘米。50 cm高比较合适。

(2)培养箱的制作:培养箱可代替培养室，也可用于过渡苗。它可以由玻璃或长方形鱼缸制成。所以可以用玻璃粘接的方式制作。它的大小可以根据你家房间的面积和组织培养的量来决定。

3、需要购买设备

普通天平(500g):用于称量配制培养基药物，或通过称量金、银、中药称量配制培养基药物、微量元素、生物调节剂；或者买微量元素和生物调节剂的时候，买包装好的。酒精灯1:用于接种时燃烧、消毒、灭菌。漏斗(也可用于购买瓶装食用油配送):用于分装培养基。2长镊子:用于接种。2把手术刀和几把刀片:用于接种。10，50，100 ml量筒:用于配制培养基。2长角勺:用于配制培养基和取药。1，2，5 ml移液器:1用于制备培养基。

耐高温塑料薄膜或牛皮纸:用于包裹培养瓶口和自制接种盒的边角。橡胶圈:用于系培养瓶口。脱脂棉:用于操作人员和组织培养设备的酒精棉球消毒。PH (5 ~ 7)试纸1:使用时可剪成小条，检测培养基的PH值。酒精1瓶:用于酒精灯和消毒。漂白粉1瓶:用于消毒。福尔马林1瓶:用于接种箱消毒(每次手术前2 ~ 10小时，将10 ~ 20 ml福尔马林倒入小白瓷皿中，手术前取出)。MS培养基所需的药物；用于配制培养基。盐酸和氢氧化钠:用于调节pH值。如果购买1紫外线灯，室内和接种箱消毒比较理想。

(二)操作注意事项

家庭手术与单位手术不同，要注意以下事项:注意安全，妥善保管药物。尤其是老人和小孩；操作过程中仔细严格消毒。接种时，操作人员应戴口罩和工作帽，避免电风扇和大风沙尘天气，家属应避免长时间操作。消毒前后避免家庭宠物进入工作场所；药品称量要准确；如果家庭没有温度控制(如调温、空调)，盛夏、冬季应避免；红掌的组织培养应循序渐进。容易培养的花可以先做，难做的花等有了经验再做。

1.培养容器和玻璃仪器的准备:

准备培养基，首先要准备好培养瓶和准备用的玻璃仪器。培养瓶一般用各种果酱瓶。首先用洗洁精浸泡瓶子4-8小时，然后用流水冲洗几次。其他玻璃仪器也需要这样清洗，直到玻璃壁变成水膜而不是水滴。清洗过的玻璃容器要倒过来，瓶子里的水要倒空。

干净的容器要防尘，尽量放在玻璃柜里。用干净的毛巾盖住容器更简单。

吸液管要吸球清洗，用蒸馏水反复吸，直到干净为止。将移液管放在长管中，以便使用。一般移液器只能用一次，也就是需要清洗，所以需要准备几个移液器。建议:10ml/2，5ml/2，1ml/5。

2.培养基的制备:

组织培养的经典培养基是ms配方，基本分为:大量元素、微量元素、铁盐、有机化合物、植物激素、糖类和支持物。这些成分的用量都在毫克级别，很难用普通天平称量。为了解决这个问题，我们可以将各组分的用量按比例放大制成母液，使用时按一定比例添加。

ms培养基母液的制备方案如下:

常量元素:硝酸铵66.0克；

硝酸钾76.0克；

无水氯化钙13.3g；

七水硫酸镁14.8g；

磷酸二氢钾6.8克。

将上述物质分别溶解后合并定容至1l，每配制1l取标准ms培养基25ml。

铁盐:5.56克七水硫酸亚铁；

7.46克乙二胺四乙酸二钠。

将上述两种分别加热溶解，混合，定容至65438±0升，调ph至5.5以下，每升MS取5 ml。

微量元素和有机化合物的量太少，为了简单起见，我们可以用蔬菜提取物或土豆提取物代替。通常我们习惯将100g菠菜用100ml水煮沸10分钟，过滤保留滤液，每1升ms培养基加入20~50 ml提取液。同理，100克带皮土豆加200毫升水煮沸15分钟，过滤滤液，每升ms可加入50~100毫升..

加入上述成分后，每升ms培养基需要30克白糖和7克琼脂。

这里应该注意的是糖和琼脂都是可变的量，应该根据需要进行调整。此外，用于制作果冻的卡拉胶也可以代替琼脂，透明度更好。

加入上述配料后，体积约为800 ml，用微波炉加热至琼脂全部溶解。此时加入所需的植物激素(通常配制0.1%的溶液，因此培养基中每1 ml换算成1ppm)。然后加水至1100毫升的体积(1.1升)。之所以加0.1升，是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调节ph值到5.8~6.0。

3.用ms粉配制培养基:

目前国内一些化工公司开发了简易ms培养基粉，大大简化了培养基的配制，根据不同公司的说明书选择培养基的类型。我们以ms的原粉为例:ms培养基原粉，包括大量元素、微量元素、铁盐、有机化合物、糖、琼脂，一般按使用方法称取，放入微波炉中加热溶解，加入激素，定容至1100ml(1.1升)，调ph值至5.8。

4.子包装:

将准备好的培养基分装在培养容器中，注意趁热分装，因为琼脂在40度以下会凝固。每个培养瓶中的培养基约为瓶容积的1/6~1/5，注意不要将培养基挂在瓶外壁上，容易造成污染。重新包装后，用聚丙烯薄膜或装有方便面的袋子封口，用橡胶圈固定(橡胶圈耐热，尽量选择自行车内胎)。

5.消毒:

建议买一些医疗器械商店的“杀菌效果试纸”用于家用高压锅的消毒，可以标明杀菌效果，达到杀菌效果会变色。将试纸和培养基同时放入锅中，加热至大量蒸汽冒出，加压切，小火保持30~40分钟。

灭菌后自然冷却，取出培养基，置于阴凉无尘处备用。

6.接种箱的准备:

新做的接种箱一定要干净，尽量没有死角。每次使用前2小时，将操作所需物品全部放入接种箱，然后在小烧杯中加入3-5g高锰酸钾，放入接种箱。将2-3ml甲醛溶液倒入箱内的烧杯中，几秒钟后会出现甲醛蒸气，使接种箱内所有物品得到第一次消毒。同时打开紫外线灯进行照射。紫外线灯由高压穿透汞蒸气产生，紫外线二次杀菌。紫外线照射约15分钟后，会激发氧气形成臭氧，臭氧作为杀菌的第三道防线。经过三次灭菌，接种盒基本可以达到无菌标准。

手术前15分钟内，将5 ml浓氨水倒入刚才用来蒸发甲醛的烧杯中。因为甲醛对人体有毒，所以氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质，从而中和甲醛的刺激性蒸汽。此时不要关闭紫外线灯，继续照射，直到手术前5分钟关闭，保持黑暗5分钟，再打开日光灯进行手术。维持黑暗5分钟的原因是紫外光通过作用于dna的胸腺嘧啶形成四聚体而杀死微生物，但微生物有一种光复活蛋白，可以在可见光存在下还原胸腺嘧啶四聚体，使微生物复活。这种效应被称为“光复活”，所以关掉紫外线后需要保持几分钟的黑暗，以避免光复活的出现。

如何在家中进行组织培养

准备

由于条件限制，家庭组织培养无法配置大量的营养培养基，一般每次配置1升为宜。煮沸后用PH试纸测量，分装成35-40瓶，用棉塞塞住，用包装纸包好。(棉条做棉衣一定要用卷棉，不能用脱脂棉，然后用纱布裹紧，用棉线扎紧。棉塞的紧密度应该是便携式棉塞瓶不会滑动。)然后放入高压灭菌器高压灭菌。当蒸汽从高压釜的喷嘴喷出时，扣上压力阀，从压力阀喷出空气开始计时，持续维持在15-20分钟，然后关火。压力消失后，打开锅盖，取出营养培养基，放入接种箱备用。在第一个实验中，当没有观察到霉菌生长时，灭菌的培养基应该放置三到五天才能使用。如果长了霉菌，说明杀菌时间不够，需要适当增加杀菌时间。

接种疫苗

将灭菌后的培养基、无菌水、消毒剂和用过的设备放入接种箱。由于接种箱内的容积比较小，所有使用过的物品都要有序的摆放在相应的位置，不能随意摆放。箱内湿度大，必须用打火机代替火柴点燃酒精灯。要特别注意准备装污水和污物的容器，尽可能大，因为操作时不允许从箱子里拿出东西。将所有物品放好后，将装有10-20 ml福尔马林的磁杯放入盒中(最好不要用玻璃杯，因为反应时温度高，容易爆裂。)，倒入2-5g高锰酸钾(PP粉)使其蒸汽充满箱体，达到杀菌效果。此时应封闭接种箱的排气孔和操作孔，避免甲醛蒸气迅速扩散。箱内蒸汽耗尽后才能开始接种，大概需要5-10小时。

接种时，取下密封在接种箱通风孔和操作孔上的封条，取出磁杯熏蒸，将接种材料送入接种箱，打开紫外灯，15分钟后关闭紫外灯并打开照明灯，然后开始工作。手术时一定要树立无菌观念，把一切都当成带菌，时刻注意预防。工作是由于箱内高温高湿，手容易出汗，所以每瓶接种后要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作时要注意防火，因为空间小，一不小心很容易烫伤手指或者引起酒精火灾。打开瓶塞时，将瓶口置于酒精灯上方，用右手无名指和小指捏住棉塞尾部，轻轻拉出棉塞。棉塞不能放在箱子里的物品上。接种后，在酒精灯和棉塞上烧瓶口，然后轻轻塞在酒精灯的火焰上方，系上包装纸，用铅笔标注品种、接种日期和编号，然后重复。

事实上，与clean bench相比，人们在工作中感觉要舒服得多。污染率也很低，熟练操作后几乎不产生污染。接种后，愈伤组织分化、幼苗分化和生长状态与超净平台上接种的无差异。

培养

在家的业余条件下是无法控制栽培条件的，要充分利用自然条件。接种后的培养瓶可放在散射光强的地方，如靠窗的书柜、书桌等，但应避免阳光直射。一般在22-28摄氏度的室温下都能正常生长，不属于特殊品种，不需要特殊照顾。如果室温太低，可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简易的培养箱，在里面装一两个15-25瓦的白织灯，既能补充光线又能提高培养温度。夏天温度过高的时候，有条件的话可以放在空调房里。如果没有空调房，很难降温，但大部分试管苗都能忍受，不会死。幼苗长大后，放在书柜或工作台上，感受自己培育的生机勃勃的小生物，无疑是一种享受。

培养

当幼苗长到一定程度时，可以配置一些生根培养基，转移培养幼苗生根，等到某个根系长好了，就可以出瓶种植了。瓶外育苗时，一定要注意以下几个方面:一是要适当降低温度；二是增加湿度；三要严格控制杂菌的危害；四是保证种植介质疏松透气；五是保证适当的采光。我通常用跖骨、锯末和稻壳作为混合基质。栽完苗，我用百菌清喷根，用塑料薄膜覆盖。少数幼苗只是简单地用玻璃覆盖。大约15天以后，可以去掉覆盖物，进行正常管理。

其实在家里进行组织培养并不是一件很困难的事情。只要动动脑筋，想点办法，很容易做到。万事开头难，方法总比困难多。65438到0974我是某县烤烟研究所所长，但是原来条件不允许，科研经费很紧张。当初科研经费一年才3000元。那一年我做了烟草的花药单倍体，水稻的花药培养，柑橘的胚乳培养，黑皮甘蔗的茎尖组织培养，三七的愈伤组织培养，黑结草(石斛)种子的无菌培养，体细胞融合。我们用这种方法做了这件事。当时北京上海的很多研究所都来看过，非常惊讶。他们以为珍贵的组培苗被我们扔得到处都是。令人难以置信的是，他们做不到，但他们能在一个非常偏僻的山区做到。我说这话的意思不是吹嘘自己，而是告诉想从事这个行业的朋友，不要低估自己的能量，也不要迷信权威。只要他们有信心，就会严格按照科学规律去做。没有什么是不可能的。

家用组织培养基质的选择及效果评价

选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。

选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑:一是基础培养基；二是各种激素的浓度和相对比例。

MS培养基适用于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适用于许多单子叶植物，尤其是N6培养基对小麦、水稻等禾本科植物非常有效，白色培养基适用于根培养。

首先尝试这些介质进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力、物力的消耗。通过一系列初步测试后，可根据实际情况对部分组件进行小范围调整。

在进行调整时，可以参考以下情况。第一，当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐比铵盐好，但单独用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移。如果同时加入硝酸盐和少量铵盐，这种漂移就会被克服。第二，当某些元素供应不足时，培养出来的植物会出现一些症状，可以根据症状进行调整。比如氮不足时，培养的组织往往呈现花色苷的颜色(红色和紫色)，愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些非常蓬松甚至透明的愈伤组织；铁和硫缺乏时，组织会失去绿色，细胞分裂停滞，骨痂出现褐色衰老症状；当硼缺乏时，细胞分裂趋于缓慢和过度伸长；当锰或钼缺乏时，细胞生长受到影响。

培养基中外源激素的作用也会造成培养中的一些类似情况，所以要仔细分析，不能轻易下结论。