如何提取植物多糖?
示例:蒽酮比色法,具体步骤
一、仪器、试剂和材料
1.仪器:电子天平、超声波清洗机、电热恒温水浴锅、抽滤设备、分光光度计、容量瓶、移液管等。
2.试剂:
(1)葡萄糖标准溶液:l00?克/毫升
(2)浓硫酸
(3)蒽酮试剂:将0.2 g蒽酮溶解在100 mL浓H2SO4中。当天准备,当天使用。
3.材料:甜高粱、甘草
二。操作步骤
1.制作葡萄糖标准曲线
取7支大试管,根据下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液:
管道编号
1
2
三
四
五
六
七
葡萄糖标准溶液(毫升)
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8
蒸馏水(毫升)
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2
葡萄糖含量(?g)
10
20
30
40
60
80
立即向每个试管中加入4.0mL蒽酮试剂,并迅速浸入冰水浴中冷却。每管加完后,一起浸入沸水浴中,盖上管口,防止蒸发。从水浴中煮沸开始,精确煮沸10min,取出,用冰浴冷却至室温,以第一管为空白,在波长620 nm处快速测量其他管的吸收值。基于标准葡萄糖含量(?g)以吸光度为横坐标,绘制标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取:粉碎样品,105?c .干燥至恒重,精确称取1~5 g,置于50mL三角瓶中,加入25mL沸水,加盖,超声提取10 min,冷却,过滤(抽滤),用沸腾蒸馏水反复洗涤残渣,过滤(抽滤),收集滤液于50mL容量瓶中,定容至刻度,即得可溶性糖提取物。
3.稀释:吸取2mL提取液,置于另一个50mL容量瓶中,用蒸馏水定容,摇匀。
4.测定:吸取1 mL稀释提取液于试管中,加入4.0 mL蒽酮试剂,一式三份;在空白试管中,用等量的蒸馏水代替提取液。以下操作与标准曲线制作相同。根据A620的平均值,在标准曲线上查出葡萄糖的含量(?g).
三、结果处理:
C × V总计× D
样品的含糖量(%)=————×100%
宽×高测量值× 106
其中:标准曲线上检测到的c-糖含量(?g),
v total-提取物的总体积(mL),
v测量——测量时取体积(mL ),
D——稀释倍数,
W——样品重量(克),
106——样品重量单位由g转换为?g的乘法