羟基蒽醌化合物的纯化
蒽醌是具有以下骨架的化合物的总称。
二蒽醌类化合物包括不同还原程度的产物和二聚体，如蒽酚、恶蒽酚、蒽酮、二蒽酮类等。以及这些化合物的糖苷。在天然产物中，蒽醌常存在于蓼科、豆科、茜草科等高等植物和地衣、真菌等低等植物的代谢产物中。现代药理研究证明，蒽醌类化合物具有很强的生物活性和药理作用。主要有①止血作用:蒽醌类化合物能促进血小板生成，显著增加纤维蛋白原，缩短凝血时间，降低毛细血管通透性，改善血管脆性，增加血管收缩活性，从而促进凝血。②抗菌作用:蒽醌类化合物对多种细菌有不同程度的抑制作用，其中葡萄球菌和链球菌最敏感，志贺氏菌、白喉杆菌、枯草芽孢杆菌和伤寒沙门氏菌也较敏感。抗菌机制主要是抑制细菌糖类和代谢中间体的氧化脱氢，抑制蛋白质和核酸的合成，从而避免了临床上某些抗生素的毒副作用和耐药性。(3)泻下:大部分结合的蒽醌苷由于糖基的保护，不经吸收直接到达大肠，在肠道内被细菌酶分解为苷元和糖类。糖原刺激大肠粘膜，抑制肠腔对钠离子的吸收，使大肠含水量增加，因蠕动过度而引起腹泻。④利尿作用:蒽醌类化合物可增加尿量，促进输尿管蠕动，尿中钠、钾也明显增加，产生利尿、降压作用。其作用是减少肠道氨基酸的重吸收，抑制肝、肾组织尿素的合成，增加血液中游离必需氨基酸的浓度，利用体内尿素氮合成机体蛋白和抑制肌肉蛋白的分解，增加尿素和肌酐的排泄。此外，随着基础理论研究的深入，为蒽醌类化合物的临床应用提供了理论基础。含蒽醌类中药制剂的临床应用已涉及多种疾病的治疗，如冠心病、粘膜溃疡、淋巴结结核、烧伤、慢性胃炎、急性胆囊炎、骨科疾病、急性脑血管疾病等危重杂病的治疗。
植物药中存在的蒽醌衍生物多为羟基蒽醌及其苷类。大部分蒽醌苷由蒽醌的羟基与糖缩合而成，少数由糖与蒽醌的碳原子直接连接而成。一般结合蒽醌的分子量小于500，易溶于水和有机溶剂，游离蒽醌的分子量在300左右，易溶于乙醚、氯仿、苯、乙醇等有机溶剂。，也可溶于碱性水溶液如氨水和氢氧化钠溶液，但不溶于水。目前从天然产物中提取的含蒽醌类化合物的产品主要是中草药粗提物，粗提物中总蒽醌含量不超过20%。常用乙醚、苯、氯仿等有机溶剂精制中草药中的蒽醌类化合物，虽然得到的中草药提取液总蒽醌含量可达50%以上。但是，这些有机溶剂是易燃易爆的有毒有害试剂。提取物中的溶剂残留如果控制不好，会对人体造成很大的伤害，而且这种方法很危险，污染环境，不适合大规模生产。
本发明的目的是提供一种操作简单、安全、无污染、成本低、从植物药物中提取的蒽醌选择性高、有效成分含量高的分离提取方法。
本发明从植物药物中提取分离蒽醌类化合物的方法是通过以下步骤实现的:
将含有蒽醌类成分的生药按常规方法提取，得到有效成分的粗提物，将粗提物加水，用碱溶液调节PH值至6.5-10，加入到装有大孔吸附树脂的吸附柱中，粗提物(G)与树脂(ml)的重量比为1∶10-10。用大孔吸附树脂柱吸附，用水和洗脱液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到含有蒽醌的提取物，其中总蒽醌含量≥50%。
本发明所述的粗提物是指通过常规方法用水或有机溶剂提取含蒽醌类化合物的原料药材，除去残渣，将提取物适当或直接浓缩至干而制备的有效成分提取物。粗提取物也可以通过普通的精制方法进行预处理。粗提物中蒽醌的总含量为5-30%。
本发明中提到的碱性溶液是指碱性水溶液，例如氢氧化钠、氢氧化钾和氨水。
本发明中提到的有机溶剂是指甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。
本发明的大孔吸附树脂为苯乙烯型、2-甲基丙烯酸酯型等大孔吸附树脂，粒径为210 ~ 10080目，比表面积为100 ~ 300 cm2/g，孔径为1020 ~ 50A 300a。
本发明所述的洗脱剂是指甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯及其混合溶液，碱性水溶液如氢氧化钠、氢氧化钾和氨水，以及碱性水溶液和上述有机溶剂的混合溶液。
本发明的上柱方式也可以是:先将粗提物溶于有机溶剂中，与大孔吸附树脂干粉混合，然后减压蒸发有机溶剂，再上柱。
大孔吸附剂是70年代发展起来的新技术。国外最早用于废水处理、制药工业、分析化学、临床鉴定和治疗。20世纪70年代末，我国开始使用大孔吸附树脂提取分离中草药化学成分。
大孔树脂一般为白色球形颗粒，理化性质稳定，不溶于酸、碱和有机溶剂。良好的有机物选择，不受无机盐和强离子低分子化合物存在的影响。大孔吸附树脂是一种结合了吸附和筛选原理的分离材料，不同于以往使用的离子交换树脂的分离原理。它的吸附是范德华引力或氢键的结果。筛分原理是由其多孔结构决定的。由于这些特性，有机化合物，尤其是水溶性化合物的纯化大大简化。从微观形态上看，大孔吸附树脂含有许多由微观球体组成的网状孔隙结构。当这些球由偶极矩很小的单体聚合而成时，不含任何官能团的吸附树脂为非极性吸附树脂，例如苯乙烯-二乙烯苯体系的吸附树脂。这类吸附树脂在孔表面具有很强的疏水性，可以通过小分子中疏水部分的相互作用来吸附溶液中的有机物。中极性吸附树脂是指含有酯基的吸附树脂，例如一种由丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯与乙二醇二甲基丙烯酸酯交联的* * *聚合物，其表面存在疏水部分和亲水部分。极性吸附树脂是指含有酰胺基、腈基、酚羟基等氮、氧、硫极性官能团的吸附树脂。此外，含有氮、氧和硫等配体基团的离子交换树脂有时也称为强极性吸附树脂。由于吸附和筛分的原理，根据吸附力和分子量的不同，有机化合物在大孔吸附树脂上被一定的溶剂洗脱分离。本发明利用大孔吸附树脂中非极性和中性树脂的特性，分离纯化植物药物中的游离蒽醌和结合蒽醌。
本发明用大孔吸附树脂吸附法代替有机溶剂萃取法从中药粗提物中纯化精制蒽醌类化合物，避免了有毒有害溶剂的使用，操作过程简单，成本低廉，产品质量易于控制，适合大规模生产。中药制剂有效成分明确，有效成分含量提高到一个更高的水平，为中药制剂的国际化和现代化提供了便利。
实施例1:从大黄中提取蒽醌化合物
取大黄生药粉末500g，用适量95%乙醇浸泡65438±02小时，然后加热回流提取三次(三次95%乙醇提取量和提取时间分别为800ml和65438±0小时；500ml，0.5小时；500ml，0.5小时)，合并提取液，过滤，滤液浓缩至一定体积，上聚酰胺柱，用水和95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到大黄粗提物。取大黄粗提物10g5g，溶于无水乙醇中，上大孔吸附树脂柱(树脂结构为苯乙烯型，粒径为5020-80目，比表面积为300cm ~ 2400cm ~ 2/g，孔径为30A100A)，用水和95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，得总蒽醌含量。3.5%。
实施例2:从虎杖中提取蒽醌
取虎杖生药粉末500g，用95%乙醇浸泡65438±0.2小时，然后加热回流提取三次(95%三次，乙醇提取量和提取时间分别为800ml和65438±0小时；500ml，0.5小时；500ml，0.5小时)，合并提取液，过滤，滤液浓缩至一定体积，上聚酰胺柱，用水和95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到虎杖粗提物。取虎杖粗提物10g5g，溶于无水乙醇中，上大孔吸附树脂柱(树脂结构为苯乙烯型，粒径50目，比表面积300 cm2/g，孔径30A100A)，用水和95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，总蒽醌含量≥52%。3.5%。
实施例3:从何首乌中提取蒽醌
取何首乌生药粉500克，用适量80%乙醇浸泡65438±02小时，然后加热回流提取三次(三次80%乙醇提取量和提取时间分别为800毫升和65438±0小时；500ml，0.5小时；500ml，0.5小时)，合并提取液，过滤，滤液浓缩至一定体积，上聚酰胺柱，用水和95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到何首乌粗提物。取何首乌粗提物10g5g，用无水乙醇溶解，上大孔吸附树脂柱(树脂结构为苯乙烯型，粒径为5020-80目，比表面积为300cm2400cm2/g，孔径为30A100A，用水和95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，总蒽醌含量≥
实施例1:从大黄中提取蒽醌化合物
取处理后的大孔吸附树脂120 ml(树脂结构为苯乙烯型，粒径为5020~80目，比表面积为300400cm2，孔径为30100a)，用湿法装柱。取大黄粗提物5g，加入100ml水，用4%氢氧化钠调节pH至7-8，搅拌溶解，然后以8-15滴/分钟的流速上样。当所有样品加入后，用水洗涤至流出液几乎无色或淡黄色，然后用95%乙醇洗脱液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩并干燥。
实施例2:从虎杖中提取蒽醌
取处理后的大孔吸附树脂120ml(树脂结构为苯乙烯型，粒径5020~80目，比表面积3400cm2，孔径30100a)，湿法装柱。另外，将5g虎杖粗提物加入100ml水，用4%氢氧化钠调节pH至7-8，搅拌溶解后上样，流速为8-15滴/分钟。当加入所有样品时，用水洗涤直至流出液几乎无色或浅黄色，用95%乙醇洗脱液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩并干燥。
实施例3:从何首乌中提取蒽醌
取处理后的大孔吸附树脂120 ml(树脂结构为苯乙烯型，粒径为520-80目，比表面积为3400cm2，孔径为3100a)，用湿法装柱。另外，何首乌5g。向粗提物中加入100ml水，用4%氢氧化钠调节pH至7-8，搅拌溶解后上样，流速为8-15滴/分钟。加入所有样品后，用水洗涤至流出液几乎无色或微黄色，用95%乙醇洗脱液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩并干燥，得到产物。
1.一种从植物药物中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于包括如下步骤:将含有蒽醌类化合物的原料药材用常规方法提取，得到有效成分的粗提物，将粗提物加水，用碱溶液调节PH至6.5-10，将粗提物加入装有大孔吸附树脂的吸附柱中，粗提物量(g)等于树脂量(g)。用大孔吸附树脂柱吸附，用水和洗脱液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到含有蒽醌的提取物，其中总蒽醌含量≥50%。
2.根据权利要求1所述的从植物药物中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为苯乙烯型、2-甲基丙烯酸酯型等大孔吸附树脂，粒径为2010 ~ 80100目，比表面积为100 ~ 300 cm2。
3.根据权利要求1所述的从植物药物中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于，所述洗脱液是指甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯及其混合溶液，碱性水溶液如氢氧化钠、氢氧化钾和氨水，以及碱性水溶液和上述有机溶剂的混合溶液。
本发明涉及一种从植物药物中提取分离蒽醌类化合物的方法。本发明用大孔吸附树脂吸附法代替有机溶剂萃取法从中药粗提物中纯化精制蒽醌类化合物，总蒽醌含量≥50%，避免了有毒有害溶剂的使用，操作工艺简单，成本低，产品质量易于控制，适合规模化生产。