银杏叶滴丸中萜内酯含量测定方法的改进研究

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中药第42卷12号2011年65438+2月。

黄，李，*

浙江省食品药品检验所，浙江杭州310004。

目的建立银杏叶滴丸中萜内酯的含量测定方法。方法采用高效液相色谱-ELSD法。流动相为甲醇-水(30∶70)，体积流速为0.8 mL/min。ELSD检测器和漂移柱为diamon sil c 18(150mm×4.6mm，5微米)。

管温为105℃，氮气体积流量为3.0 L/min。结果银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的含量分别为1 672.2 ~ 1033.2、1 026.4 ~ 6 158.4、527.8 ~ 3 166.8和2 200.8。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯和总萜内酯的平均回收率分别为100.3%(RSD 2.5%)、108.1%(RSD 3.5%)和116.0%(RSD 4.5%)。结论该方法简便、可控、重现性好，可用于银杏叶滴丸中萜内酯的定量测定，为中成药中多指标成分的同时测定提供了有效的思路和解决方案。

关键词:银杏叶滴丸；萜内酯；银杏叶提取物；银杏内酯a；银杏内酯b；银杏内酯c；白果内酯中文分类号:R286.02文献识别码:A文号:0253-2670(2011)12-2456-03。

银杏叶滴丸中萜内酯含量测定方法的改进

魏，李映红，

浙江省食品药品检验所，杭州310004

关键词:银杏叶滴丸；萜内酯；银杏叶提取物；银杏内酯A；银杏内酯B；银杏内酯C；银杏内酯

银杏叶滴丸是银杏叶提取物的新制剂，具有活血化瘀、通络的作用，用于血瘀引起的胸痹、心痛、中风、半身不遂、舌强、冠心病稳定型心绞痛、脑梗塞[1]。目前银杏叶滴丸由浙江万邦制药有限公司独家生产，标准载于《中国药典》(2010版)。萜内酯是银杏叶提取物的活性成分之一[3]。银杏萜内酯能高选择性地拮抗PAF诱导的血小板聚集，其中银杏内酯B作用最强，从而降低血液粘度，防止组织器官缺血缺氧[4]。银杏萜内酯的测定通常采用HPLC-ELSD法，以银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯为对照[2，5-7]，统计这四种对照的总量。为了简化操作，节约资源，本实验以银杏叶提取物为对照进行方法学考察，并对原标准进行优化。1仪器和材料

安捷伦1200系列高效液相色谱仪(美国安捷伦公司):包括G1311A四元泵和G1322A脱气。

收到日期:2011-07-12

基金项目:国家“十一五”科技支撑计划(2009ZX09308-004)

作者简介:黄(1983-)，女，浙江温州人，硕士，主要从事药品质量分析工作。

电话:[1**********]传真:(0571)86459425电子邮件:卫青-h@163.com

*通讯员郑成电话:(0571) 86459414邮箱:Joe FF30 @ 163.com。

机、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、Alltech 2000ES蒸发光散射检测器。

银杏内酯(BB，批号110965-200404)、银杏内酯A (GA，批号110862-200608)、银杏内酯B (GB，批号110868)。银杏叶对照提取物(批号091004)由浙江康恩贝药业有限公司提供(标准化，含GA 26.78 mg/g，GB 16.44 mg/g，GC 8.45 mg/g，BB 35.25 mg/g)。乙酸乙酯、乙酸钠和盐酸为分析纯；甲醇是色谱纯的，水是重蒸馏水。银杏叶滴丸(批号100310、100311、100312、100209、1004065438+)方法和结果2.1色谱条件

色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5微米)，流动相为甲醇-水(30∶70)，体积流量。

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0.8 mL/min，ELSD检测器，漂移管温度65438±005℃，氮气体积流量3.0 L/min。根据BB峰计算理论塔板数。

不低于2500；GA峰和GB峰的分离度大于1.5。色谱图见图1。

一个B

三

四

三

四

三

四

t / min

1-BB 2-GC 3-GA 4-GB

0 10 20 30 0 10 20 30 0 10 20 30

图1银杏叶对照提取物(a)、银杏叶滴丸(b)和混合对照品(c)的HPLC图谱图1银杏叶提取物对照(a)、银杏叶滴丸(b)的HPLC色谱图，

和混合参考物质(C)

2.2混合参考溶液的制备

527.8 ~ 3 166.8，2 200.8 ~ 13 204.8 ng呈良好的对数线性关系。2.6精度检验

准确吸取10 μL上述对照提取液，重复进样5次，记录峰面积。GA、GB、GC和BB峰面积的RSD分别为0.2%、0.4%、0.5%和0.1%，表明仪器精密度良好。2.7稳定性测试

取批号为100310的样品制备供试品溶液，分别在0、4、10、16、24和30 h注入色谱仪，记录GA、GB、GC和BB的峰面积。结果表明，GA、GB、GC和BB峰面积的相对标准偏差分别为0.5%。2.8再现性测试

取批号为100310的* * 6样品约0.5 g，照试液制备方法操作，注入液相色谱仪，依法测定。总萜内酯的相对标准偏差为2.3%，GA、GB、GC和BB的相对标准偏差分别为2.4%、3.0%、2.8%和6544。2.9样品回收试验

按供试品溶液的制备方法，分别取同批样品(批号100310)约0.25 g和* * 6份，加入约0.1 g标准化银杏叶提取物，注入液相色谱仪，依法测定，计算回收率和RSD。结果表明，GA、GB、GC、BB和萜内酯的平均回收率分别为100.3%、108.1%、116.0%、90.4%和99.3%，相对标准偏差分别为2.5%和99.3%。2.10样品测定

取6批样品，每批约0.5 g，照供试品溶液的制备方法操作，注入液相色谱仪，依法测定。参考中国医学。

准确称取GA、GB、GC、BB分别为22.47 mg、18.97 mg、10.25 mg、19.60 mg，置于20 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照溶液。2.3测试溶液的制备

取银杏叶20片，研细，混匀，取0.5 g，准确称取，置于带塞锥形瓶中，加入20 mL水、4滴2%盐酸溶液和20 mL乙酸乙酯，加热回流30min；；冷却至室温，转移至分液漏斗，分离乙酸乙酯溶液，用乙酸乙酯萃取水溶液三次，每次20 mL，合并乙酸乙酯溶液，用5%乙酸钠溶液萃取20 mL，分离乙酸钠溶液，用乙酸乙酯萃取20 mL，合并乙酸乙酯溶液，用水洗涤两次，每次10 mL，分离水溶液，用乙酸乙酯萃取20 mL，合并。

2.4对照提取液的制备

取标准化银杏叶对照提取物0.15 g，准确称取，按供试品溶液的制备方法，制备对照提取液。

2.5线性关系调查

准确吸取上述对照提取液2、4、6、8、10、12 μL，分别注入高效液相色谱仪，以进样量的对数值为横坐标(X)，以峰面积的对数值为纵坐标(Y)，进行线性回归，得到回归方程:Gay = 1.249X-2。GB Y = 1.421.6 X-4.629 1，r = 0.999 4；GC Y =1.646 2 X -3.687 3，r = 0.9996；BB Y = r = 0.999 4；显示GA，GB，GC，1.257 4x-1.986 1，

BB范围从1 672.2到1033.2，1 026.4到6 158.4，

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[1]佳能萜烯内酯的量基于GA、GB、GC和BB的总量。

研究了漂移管温度和氮气体积流量。结果表明，漂移管温度为105℃，氮气体积流量为3.0 L/min时，响应值最大。

同时，用常规混合参比法测定了六批样品中总萜内酯的含量。通过比较，两种方法的相对平均偏差分别为0.9%，0.8%，0.4%，65438±0.3%，0.0%和65438±0.2%。

为了使标准更加科学和简单，萜内酯的结果见表1。

表1银杏叶滴丸中总萜内酯的定量测定结果(n = 2)

表1萜烯内酯的测定

银杏叶滴丸(n = 2)

批号

总萜内酯/(毫克丸？1)

银杏叶对照提取方法

混合参考方法

100310 1.11 1.09 100311 1.17 1.19 100312 1.23 1.2 4 100209 1.20 1.17 100401 1.20 1.20

100402 1.25

1.28

3讨论

根据《中国药典》2010版[1]“加水10 mL，用温水溶解”，发现部分残渣不能完全溶解，故本实验对供试品溶液的提取条件进行了考察。结果表明，20 mL，...，加入20 mL乙酸乙酯，回流30 min”即可解决。

在本实验中，比较了正丙醇-四氢呋喃-水

[4-6]

和甲醇-

在水[8-9]流动相体系中，发现4种银杏内酯在两种体系下均可在30 min内达到基线分离。考虑到正丙醇和四氢呋喃都是不常用的试剂，尤其是四氢呋喃有很强的毒性和刺激性，流动相为甲醇-水(30∶70)。

本实验考察了柱温为25℃、30℃和40℃时色谱峰的分离效果，结果表明，所有色谱峰均能得到有效分离。还研究了Diamonsil C18色谱柱(150毫米×4.6毫米，5微米)、安捷伦Eclipse XDB-C18色谱柱(150毫米×4.6毫米，5微米)和Kromasil 100-5 c 18 c 65438+。

本实验对蒸发光散射检测器的参数进行了优化

改进了液相色谱的预处理方法和流动相系统。为了节省对照品和化学试剂的用量，采用银杏叶提取物进行定量，为中成药多指标同时测定提供了有效的思路和解决方案，节省了中药对照品，减少了健康。

实际检验成本低，好处大。参考

[1]金红，黄易，王继生，等。银杏叶提取物的辐射损伤。

对受伤小鼠的保护作用[J].中草药，2010，41(8):1339-1342。

[2]中国药典[S]。A.2010。

[3]徐燕芬，张丽娟，宋新波。银杏叶提取物的研究进展。

[J]。药物评价研究，2010，33(6): 452-456。

[4]Satyan K . S .，Jaiswal A . K .，Ghosal S，等.抗焦虑药

印度银杏酚酸共轭物的活性研究[J].精神药理学，1998，136(2):148-152。[5]严，谢佩珊。高效液相色谱-ELSD。

萜内酯含量[J].中国药物分析杂志，2001，21(3):173-176。

[6]山、、曹、。高效液相色谱-ELSD法测定银杏叶

提取物中内酯的含量[J]。中草药，2004，35(12):1366-1368。

[7]张福奎，刘振国，刘长笑。国产和进口银杏叶中的萜类化合物。

内酯的比较[J].药物评价研究，2011，34 (1): 35-38。[8]中国人民* * *和中国卫生部药品标准中药处方制剂[S]。

体积19.5438+0998。

[9]盛智恒，李，.高效液相色谱-ELSD法测定银杏叶提取物

四种萜内酯的含量[J].浙江中医学院学报，2004，28(4): 82-83。

“加水(