薄层色谱的操作技术和要点

薄层色谱的操作技术和要点主要包括薄层色谱板的选择、进样、展开、显色、检查和记录。

1,选择薄板

薄层板是指将固定相涂在玻璃板、塑料板或铝箔上的载体。常用的固定相有硅胶、氧化铝、微晶纤维素等。根据样品的性质和分离目的选择合适的固定相。薄层板厚度应均匀,表面应光滑,不得有斑驳、水印等缺陷。

2、样本

点样是指用微量毛细管或微量注射器等工具将待测样品溶液点在薄层板上的过程。取样时应注意:首先,取样位置应距薄层板底部1 ~ 2.5 cm,距边缘至少1cm,以防边缘效应。其次,取样直径应小于5mm,一般为2 ~ 4 mm,以防斑点扩散或重叠。

再者,斑点间距要在1 ~ 1.5 cm,防止斑点相互干扰。最后,取样量要合适,太多会导致斑点扩散或重叠,太少会导致检测困难。取样后,应在展开前蒸发并干燥溶剂。

第三步:扩张

展开是指将进样的薄层板放入装有流动相的展开室中,使流动相沿固定相上升,带动样品中的组分移动分离的过程。显影时要注意:首先要对显影室进行预饱和,即显影前要将显影剂放入显影室,并在室壁上贴上滤纸使其饱和,以保证显影剂的稳定性和重现性。

其次,展开剂要根据样品的性质和分离的目的选择合适的溶剂或溶剂混合物,使用时要新混合,以免变质或污染。再者,摊铺距离要合适,一般8 ~ 15 cm,不能太长也不能太短。最后,展开后应及时取出薄层板,在适当位置标出溶剂的前线,待溶剂蒸发干燥后,再进行检验或显色。

4.彩色胶片显影

显色是指用紫外光照射展开的薄层板或喷洒显色剂,使样品中的成分在薄层板上形成可见斑点的过程。要注意显色:首先,对于有色成分,可以在可见光下直接检查。其次,对于无色的组分,可以用紫外光照射,考察各组分的吸收或荧光特性。

再者,对于无色无荧光的成分,我们可以用显色剂喷洒,利用各成分与显色剂的化学反应或物理吸附,产生不同颜色的斑点进行检验。最后,应根据样品的性质和检测的目的选择展开剂,喷洒要均匀适当,避免过多或不均匀影响检测效果。

5.查看和记录

检查记录是指薄层板显色后观察、测量、比较、记录的过程。检查记录时应注意:首先,对于有色或荧光斑点,其颜色、形状、大小等特征可在可见光或紫外光下直接观察到。其次,对于无色无荧光的斑点,显色后可用可见光观察其颜色、形状、大小等特征。

此外,对于每个斑点,应该测量特定的偏移值(Rf值),即从斑点中心到原点的距离与从溶剂前端到原点的距离的比值。Rf值是反映样品中各组分在固定相和流动相中相对迁移率的指标,在一定条件下对每种化合物都是一个恒定值。