细菌学检验中生长抑制试验的概念

其实原理比较简单:MTT盐可以利用活细胞的线粒体脱氢酶还原成蓝紫色颗粒,溶解后颗粒的颜色深浅可以反映细胞的活性。

操作程序

1.将细胞接种于密度为4 .0×10 8 /L的96孔培养板中,于37℃5% CO2培养箱中培养至细胞贴壁,加入长春新碱使终浓度分别为0、0.1和60。

2.37℃,5% CO2培养箱培养20小时,每孔加入20μL Mtt,继续培养4小时。

3.吸出培养基,用无血清培养基洗涤1次,加入MTT裂解液100μL,在37℃含5% CO 2的培养箱中孵育8h。

4.待紫色晶体完全溶解后,用酶联免疫吸附法检测各组细胞在A 570nm/A 450nm处的吸光度,以A 570nm/A 450nm代表细胞的活力,以0 μmol /L药物为对照组,细胞存活率为100%。其他各组如下:存活率=(各浓度组吸光度/对照组吸光度)× 65438。

主要是配置PBS营养液,制备紫外酶标。