谁知道紫外可见分光光度法的原理？

单色光辐射通过被测物质溶液时，被物质吸收的量与物质浓度和液层厚度(光程长度)成正比，即朗伯-比尔定律，这是定量吸收光谱法的理论基础，其关系如下:

A = ECL公式(3-1)

其中a是吸光度；e为吸收系数，即单位浓度和单位液层厚度的吸收值；c是溶液浓度；l是液体层的厚度。

紫外-可见分光光度法是一种基于物质分子对波长在200 ~ 760nm的电磁波的吸收特性的光谱分析方法。《中国药典》(2005年版)共有10种药材，采用该方法评价药材的有效性。其主要特点是:灵敏度高，可达10-4g/ml ~ 10-7g/ml；准确度高，相对误差为2% ~ 5%。中药里有吸收紫外线的成分或者有颜色的成分。在一定浓度范围内，其溶液的吸收和浓度符合朗伯-比尔定律，可采用此方法进行分析。该方法适用于总黄酮、总蒽醌和总生物碱等大组分的含量测定。

2.定量测定方法

测定时，以制备供试品溶液所用的同批溶剂作为空白对照，用65438±0cm的应时吸收池在选定(调节)吸收峰波长±2nm范围内测定几个点的吸光度，或仪器在选定波长附近自动扫描测定，以吸光度最大的波长作为测定波长。一般来说，测试溶液的吸光度读数在0.3和0.7之间有很小的误差。当溶液的pH值影响测定结果时，应调整试液和参比溶液的pH值使之一致。

含量测定一般有以下几种方法。

(1)对照品的比较方法在溶液中待测物的吸收符合朗伯-比尔定律的情况下，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中待测成分的量应为供试品溶液中待测成分标示量的100% 10%，所用溶剂应完全相同。应在物质的最大波长下测定测试溶液和参考物质。

C x = (A x/A r) C r公式(3-2)

含量= (Cx× D)/W× 100公式(3-3)

其中C x是试验溶液的浓度；A x是测试溶液的吸光度；C R为参考溶液的浓度；A R是参考溶液的吸光度；d是稀释倍数；w是试样的取样量。

(2)吸收系数法首先测量对照品在λ max处的吸光度，然后得出吸收系数；相关化合物的吸收系数也可从相关手册或药典中找到。用与对照品相同的溶剂配制供试品溶液，在相同波长下测定其吸光度，计算吸收系数，计算含量。

含量% = [() x/() r] × 100%公式(3-4)

式中，()x为样品的百分吸收系数；()r是参考物质的百分比吸收系数。

使用该方法测定时，应注意仪器的校准和检定。

(3)标准曲线法从待测物质的吸收光谱中选择某一最大吸收波长，用一系列不同浓度的标准溶液测定其在该波长处的吸光度，用吸光度绘制浓度图。如果被测物质对光的吸收符合朗伯-比尔定律，则应得到一条通过原点的直线，即标准曲线。在相同条件下测量样品溶液的吸光度，可在标准曲线上读出样品溶液的浓度。