中药化学鉴定方法

香豆素基质本身没有荧光，而羟基香豆素在紫外灯下大多能显示蓝色荧光，在碱性溶液中荧光大多增强并能被识别。

香豆素荧光的有无与分子中取代基的种类和位置有一定关系，但荧光与结构的关系尚不明确。

显色反应

香豆素分子中某些基团所给出的颜色反应可以为鉴定香豆素类化合物提供一些参考。

1.铁氧肟酸反应

这是香豆素内酯结构的显色反应。在碱性条件下内酯环打开，与盐酸羟胺中的羟基缩合生成异羟肟酸，然后在酸性条件下与铁盐络合呈红色。

2.酚羟基反应

酚羟基取代的香豆素在水溶液中可与氯化铁试剂络合产生不同的颜色，可判断羟基的有无。

重氮化试剂也可用于检查酚羟基。如果酚羟基的邻对位未被取代，可与重氮化试剂反应生成红色至紫色的偶氮染料。

3.吉布的反应

吉布试剂为2，6-二氯(溴)苯醌氯亚胺，在弱碱性条件下(pH9.4)可与酚羟基对位的活泼氢缩合生成蓝色化合物。

该反应可用于判断香豆素分子的C6位是否有取代基。因为香豆素分子的内酯环在碱性条件下水解生成的酚羟基，如果对位(即C6位)没有取代基，可以与吉布试剂反应生成蓝色。如果C6被替换，吉布的反应是消极的。

4.艾默生反应

和吉布反应一样，爱默生反应也用于判断酚羟基对位是否有取代，在香豆素中，用于判断C6位是否有取代。

艾默生试剂由4-氨基安替比林和铁氰化钾组成，与酚羟基对位的活泼氢反应生成红色。

色谱鉴定

纸色谱法

由于香豆素分子大多含有酚羟基，呈弱酸性，用于纸色谱时，其在碱性溶剂体系中的Rf值比较大，在中性溶剂体系中容易产生拖尾现象。

常见的溶剂体系是含水有机溶剂体系。层析后，滤纸可先在紫外灯下观察到香豆素特有的荧光，再喷10%氢氧化钾乙醇溶液或20%SbCl3氯仿溶液显色。

2.薄层色谱

香豆素类化合物大多具有酚羟基结构。在薄层色谱中，选用硅胶作为吸附剂，用一定pH值的缓冲溶液处理，可以获得很好的分离效果。酸性氧化铝也可以用作吸附剂。显影后的斑点除了在紫外灯下观察荧光外，还可以喷洒三氯化锑等显色剂。