十大功劳属植物做出了哪十大贡献？
关于十大功劳生物碱含量测定的报道很少。报道了用薄层扫描法测定黄柏中ⅳ、ⅵ和ⅶ [12]的含量。薄层光密度法测定四种十大功劳茎中ⅳ、ⅵ、ⅶ和木兰碱[13]:HPLC法测定十大功劳叶中ⅶ [14]的含量。在变波长高效液相色谱法测定小檗属植物根中生物碱的基础上[15]，为开发利用十大功劳属植物资源，建立了高效液相色谱法测定十大功劳属植物中ⅰ ~ ⅶ的方法。这七种成分在203 nm的固定波长下可检测1次，在203 ~ 346 nm的可变波长下可检测两次。而后者不仅能使七种组分在各自的最大吸收波长处被检测到，而且避免了吸收波长不同的相邻色谱峰的干扰，从而提高了分析的灵敏度和准确度。本文采用可变波长高效液相色谱法对我国十大功劳属三种植物的根、皮、木、皮、木以及不同产地的10种植物的根进行了定量分析。由于参考物质的量少，仅对I、III和V进行了定性分析。
1仪器和试剂测试
沃特世高效液相色谱仪(510泵、490E检测器、U6K采样器、基线810色谱工作站)。
对照品:盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱购自中国药品生物制品检定所；中国药品生物制品检定所的涂研究员介绍了非洲的四己胺；小檗胺购自中国科学院林业与土壤研究所，经重结晶纯化。汉防己甲素和汉防己甲素由中国医学科学院药用植物研究所提供(对照品用硅胶薄层色谱和两种溶剂体系分离成单一斑点；经HPLC测定，主要成分的峰高和峰面积均在97%以上。植物标本由中国科学院植物研究所研究员应盛骏鉴定。乙腈为色谱纯，甲醇和磷酸二氢钾为分析纯，使用去离子水。
2实验方法和结果
2.1色谱条件[15]
色谱柱:μ-Bondapak苯基(10μm，3.9mm×300mm，美国沃特世公司)；流动相:0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(7∶3)；柱温:室温；流量:1.0ml min-1；灵敏度:0.08AUFS；检测波长:固定波长203nm，0.0-10.0min可变波长203nm，10.0min后346 nm。7种生物碱对照品的色谱图见图1。
图1 7种生物碱的色谱图(在203 nm处检测)
Ⅰ.海胆酮ⅱ。黄连素ⅲ。十四胺ⅳ。药根碱
ⅴ.粉防己碱ⅵ。巴马汀ⅶ。黄连素
2.2回归方程和线性范围
根据参考文献[15]，以样品体积(μg)为横坐标(x)，以峰面积(微伏-秒)为纵坐标(y)，得到回归方程。见表1。
2.3样品溶液的制备
准确称取0.65438±0g样品干粉于50mL磨口三角瓶中，加入20mL甲醇，称重，浸泡65438±02h，超声提取60min，称重，补足损失的甲醇，摇匀，密封静置；取上清液5.0mL于离心管中，密封后离心(10000 r min-1，10min)；取上清液(2.0mL)作为样品溶液。
表1四种生物碱定量分析的回归方程和线性范围
原料
回归方程式
r
线性范围/μg
Ⅱ
y = 9.017x×104+4.318×105
0.9993(n=7)
0.019~0.296
Ⅳ
y = 4.239 x×104-8.228×104
0.9999(n=9)
0.019~0.996
Ⅵ
y = 4.191x×104+1.446×105
0.9998(n=9)
0.020~1.008
Ⅶ
y = 4.209 x×104+1.278×105
0.9998(n=9)
0.020~1.010
2.4精度测试[15]
准确吸取10μL注射用样品溶液，重复10次测定。得到样品中各组分浓度(μg·mL-1)的RSD(%):小檗胺0.28，药根碱0.84，巴马汀0.75，小檗碱1.21。
2.5样品回收试验
准确称取0.05g5份狭叶十大功劳干干粉于50mL磨口三角瓶中，按文件[15]操作，每份重复测定3次；ⅱ、ⅳ、ⅵ和ⅶ的计算回收率分别为97.2% ~ 102.1%、98.9% ~ 100.3%、97.2% ~ 100.1%和99.9%。
2.6样品分析[15]
准确吸取65438±00μL注射用样品溶液，在203 ~ 346 nm可变波长下检测，对ⅱ、ⅳ、ⅵ、ⅶ进行定量分析，对ⅰ、ⅲ进行定性分析。然后准确注入10μL，固定波长203nm检测，得到各样品的特征光谱，对组分ⅴ进行定性分析。三种十大功劳和10种不同产地植物的根、皮、皮、茎、木中七种生物碱的分析结果见表2和表3。
3讨论
3.1本文建立的方法可在同一色谱条件下使用25分钟。
表2 3种十大功劳属植物不同部位7种生物碱的分析结果(%)，n=2
植物名称
位置
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
Ⅶ
宽苞十大功劳亚种。甘坪文种
(四川中医学校)
根
-
+
0.68
+
0.05
0.78
根皮
+
0.01
-
1.66
+
0.14
3.76
根木
+
+
0.69
+
0.06
0.84
茎皮
-
-
0.34
+
0.05
0.47
树干木材
+
-
0.53
+
0.08
0.21
金柑。)Fedde:窄叶的十大贡献
(重庆南川药物种植研究所)
根
+
0.34
+
1.17
+
0.06
1.27
根皮
+
0.98
+
3.02
+
0.20
3.54
根木
+
0.18
+
0.54
+
0.70
茎皮
+
0.29
+
1.47
+
0.19
0.41
树干木材
+
0.28
+
0.98
+
0.05
1.36
长苞铁线蕨，Longbract的十大贡献
(四川峨边)
根
+
+
0.40
+
0.62
1.73
根皮
+
+
1.10
+
1.30
6.94
根木
-
+
0.33
+
0.80
0.98
茎皮
-
+
0.74
-
0.60
1.24
树干木材
-
-
+
0.21
-
0.28
0.45
+:成分检出-:成分未检出+:含量< 0.01%。
表3 10十大功劳属植物根中7种生物碱的分析结果(%)，n=2
植物名称
生产地点
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
Ⅶ
十大功劳。)卡尔。
四川峨边
+
+
0.44
+
0.78
1.44
重庆奉节
+
0.02
+
0.50
+
0.64
2.07
鼠刺得10分，M.bodinieri Gagnep。
重庆金佛山
+
0.10
+
0.81
+
0.09
0.77
重庆药材种植所
+
0.08
+
0.79
+
0.06
1.11
重庆中医药研究院
+
+
0.41
+
0.05
0.78
湖南新华*
+
+
0.16
+
0.53
1.44
四川和湖北的十大贡献。广藿香
四川峨眉山
-
+
0.45
+
0.14
1.10
四川峨边
-
+
0.82
+
0.12
1.22
重庆缙云山
+
+
0.35
+
0.02
0.73
甘平的十大贡献。甘坪文种
重庆南川
+
0.01
+
1.01
+
0.04
1.58
四川省中医学校
-
+
0.68
+
0.05
0.78
金柑。)Fedde:窄叶的十大贡献
重庆药材种植所
+
0.34
+
1.17
+
0.06
1.27
四川峨眉山
+
+
0.82
+
0.06
1.42
湖南新华*
+
0.19
+
0.88
+
0.07
0.59
M.gracilipes(Oliv)Fedde，纤细茎的十大贡献。
四川峨眉山
-
+
0.67
+
0.15
0.99
长苞铁线蕨，Longbract的十大贡献
四川峨边
+
+
0.40
+
0.62
1.73
岩石紫黄色斜带绦虫
四川峨眉山
-
0.02
+
1.05
+
0.17
0.55
M.polyodota Fedde，多齿十大贡献者
四川峨眉山
-
0.02
+
0.67
+
0.10
0.52
重庆金佛山
-
0.01
+
0.22
+
0.13
0.30
M.sp(未知物种)
重庆金佛山
-
0.01
+
0.28
+
1.38
1.30
+:成分检出-:成分未检出+:含量< 0.01% *:测定部位为茎。
测定了十大功劳不同部位和不同产地植物中的ⅰ、ⅱ、ⅴ二苄基异喹啉和ⅲ、ⅳ、ⅵ、ⅶ原小檗碱型生物碱。该方法重现性好，精密度高，适用范围广。
3.2十大功劳属和小檗属在亲缘关系和化学成分上相似。结果表明，在相同或相似的HPLC色谱条件下，可以测定这两个属中相同的生物碱成分。
3.3在10株植物中，III的峰值很低。根据ⅳ、ⅵ、ⅶ的分子结构和峰面积推断，ⅲ的含量小于0.01%。除狭叶十大功劳外，ⅰ和ⅱ在其他植物中含量较低，峰较弱。ⅴ的峰在大多数植物中很强，含量较高(本实验中因对照品量少，未进行定量)。
3.4这七种成分在属内不同部位的分布和含量是不同的，不同的植物种类其差异程度也不同。含量基本上是根皮最高，茎皮次之，根木和茎木次之。过去茎入药[1]，但从分析结果来看，其根也是不可忽视的资源。
作者:吕成都华西医科大学光华药学院610044。
王力是小北京协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所所长。
参考
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