免疫学检测方法

1.体液免疫法主要是在体外利用抗原与相应抗体的特异性结合，在一些辅助因子的参与下发生反应，以已知抗原或抗体检测未知抗体或抗原。此外，还包括对体液中各种可溶性免疫分子的检测，如补体、免疫球蛋白、循环复合物、溶菌酶等。

2.细胞免疫分析是根据各种免疫细胞(T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞、巨噬细胞等)表面产生的独特标记和细胞因子来确定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能。)来帮助了解身体的细胞免疫水平。

体液免疫测定

1.凝集。

颗粒抗原(细菌或红细胞等。)与相应的抗体特异性结合，在电解质存在的情况下，形成肉眼可见的聚集体，称为凝集反应。

1)直接凝集反应。颗粒抗原与相应抗体直接结合引起的凝集现象，前者多为细胞表面的结构成分，如细菌或红细胞的表面结构抗原。⑴玻片法:多用于抗原的定性检测。⑵试管法:多用于抗体的定量检测。

2)间接凝集反应。可溶性抗原吸附在载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)表面。)，也就是所谓的敏化粒子。当致敏颗粒与相应的抗体结合时，会发生凝集。该反应常用于测定细菌抗体、病毒抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体以及一些自身抗体(如抗核抗体、抗肾抗体、抗甲状腺抗体等。).

根据凝集反应原理，有间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验和协同凝集试验。

2.沉淀反应。

可溶性抗原(外毒素、血清、细菌培养滤液、组织浸出液等。)与相应的抗体特异性结合，在电解质的参与下形成沉淀，称为沉淀反应。沉淀反应的抗原主要是多糖、脂类、蛋白质等。

1)单向扩散试验。这是一种抗原的定量试验，是可溶性抗原在含抗体的琼脂培养基中扩散的沉淀反应。这种方法常用于检测血清免疫球蛋白和补体成分的含量。

2)双向扩散试验。这是可溶性抗原和抗体在琼脂培养基中相互扩散的沉淀反应。这种方法常用于定性检验，如检测血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。单克隆抗体技术

3)对流免疫电泳。对流电泳是一种灵敏快速的检测方法，即电场作用下的双向免疫扩散。这种方法常用于检测血清中的乙肝表面抗原和甲胎蛋白。

3.中和试验。

特异性抗体能抑制相应抗原物质的活性，抗体使相应抗原的毒性或感染性消失的反应为中和试验。比如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗体可以使病毒失去传染性。用于诊断风湿热的抗链球菌溶血毒素“O”试验也是一种中和试验。溶血性链球菌B能产生一种溶血毒素“O”，能溶解人和兔的红细胞。该毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O”抗体中和而不发生溶血。实验中，将患者血清与溶血毒素“O”混合，作用一段时间后加入人红细胞，但红细胞不溶解成阳性反应，说明患者血清中存在抗溶血毒素“O”的抗体。当血清抗体效价达到400单位以上时，说明患者已经感染了溶血性链球菌B，有助于风湿热的诊断。

4.免疫荧光法(荧光抗体法)。

荧光素染料(如异硫氰酸荧光素等。)用于标记抗体而不影响其活性。这种抗体被称为荧光抗体。含有待检测抗原的细胞或组织切片浸渍有已知种类的荧光抗体。如果有相应的抗原，抗原会与这种抗体特异性结合，形成复合物粘附在细胞上，不易洗脱，在荧光显微镜下成为荧光可见物，从而达到诊断或定位的目的。包括直接法和间接法。

5.酶联免疫吸附试验。

这种方法的原理是利用酶(常用的辣根过氧化物酶)标记的抗原或抗体来确定被测样品中是否存在相应的抗原或抗体。有三种方法:间接法、双抗体法和竞争法。

6.溶血空斑试验。

7.蛋白质印迹技术。

免疫印迹或免疫延伸技术在南方(1975)。

抗体抗原反应

在Southernblotting基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。

细胞免疫测定

现代免疫学广泛采用了细胞生物学、免疫血清学、免疫标记、免疫组织化学等技术。，并不断发展和完善了一系列细胞免疫检测技术，用于检测各种免疫细胞的表面标志物(包括抗原和受体)，细胞的活化、增殖、吞噬和杀伤功能，各种细胞因子的活性或含量。这些技术为深入研究和了解机体免疫系统的生理和病理变化，阐明某些疾病的发病机制和临床诊治提供了有益的手段。随着细胞免疫学的快速发展，新的细胞免疫分析技术不断出现。21世纪初，新开发的项目集中在细胞因子和细胞受体的检测上。

1.淋巴细胞转化试验。

当人体淋巴细胞在体外与特异性抗原(如结核菌素)或非特异性有丝分裂原(如植物血凝素，PHA)孵育时，T细胞被激活并转化为淋巴细胞。t细胞转化可以伴随着DNA、RNA和蛋白质合成的增加，最终导致细胞分裂。可在光学显微镜下计数转化淋巴细胞的数量，或将氚标记的胸苷(3H-TdR)掺入正在分裂的淋巴细胞中，用液体闪烁分析仪测定掺入量来确定淋巴细胞转化率。2000年开始出现一种不用同位素就可以用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检测方法，叫做MTT法。MTT是甲噁唑盐，是细胞内线粒体脱氢酶的底物，细胞内的酶能分解MTT产生蓝黑色成分。该产物的量与活细胞的数量成正比。结果酶标仪(595nm)可测定光密度，作为MTT检测指标。

2.E-garland法。

人体T细胞表面有绵羊细胞受体(CD2)，可与绵羊红细胞结合形成玫瑰花状图案结构。即从分离液中分离出的外周单核细胞悬液与绵羊红细胞在体外混合，37℃培养5 ~ 10分钟，然后4℃放置过夜，对细胞悬液进行计数。大约70% ~ 80%的外周血淋巴细胞形成花环，也就是T细胞。这种方法可以用来分离T细胞。

3.T细胞亚群的检测。

4.细胞毒性测试。

Tc细胞、NK细胞、LAK细胞和TIL细胞对它们的靶细胞具有直接的细胞毒性(杀伤)作用。

抗体制备

常用的检测方法是51Cr(铬)释放法。51Cr-Na2CrO4的盐溶液与靶细胞(不同的细胞需要不同的靶细胞，如K562)在37℃培养约1小时，51Cr会进入靶细胞并与细胞质结合。可以获得51Cr标记的靶细胞。将待测试细胞毒性的细胞与用51Cr(比例约为50:1或100:1)标记的靶细胞混合。杀死的靶细胞越多，释放到上清液中的游离51Cr就越多，这是无法实现的。细胞毒性检测对肿瘤免疫具有重要价值。

5.巨噬细胞吞噬功能的测定。

将浸过中药乙醇浸提液(10%斑蝥)的滤纸(1cm2)置于受试者前臂屈曲侧皮肤上，4-5小时后取下滤纸。48小时内，皮肤可局部起泡，并含有巨噬细胞。取0.5ml囊泡液和0.01ml鸡红细胞悬液，37℃30分钟后涂片、染色、镜检，计算每个巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和平均吞噬量。本实验有助于观察肿瘤情况和疗效。

6.运动抑制试验。

当致敏淋巴细胞再次与其特异性抗原接触时，可产生迁移抑制因子(MIF)。该因子可抑制巨噬细胞和中性粒细胞的运动，使其局部化，增强其免疫功能。本实验用于体外观察受试者淋巴细胞是否受到特定抗原的刺激，从而确定机体对某种抗原的特定细胞免疫反应的功能。

7.时间分辨荧光测量技术。

时间分辨荧光测量(TRF)是一种新型的超微量非放射性分析技术。该技术的灵敏度和特异性与放射性核素测量相似，但没有放射性测量的缺点，所以出现时间短，但进展很快，有取代放射性测量的潜力。

8.细胞因子检测技术。

自2005年以来，细胞因子检测已广泛应用于中医临床和实验室。

9.细胞受体的检测。

受体是细胞表面标志之一。通过对受体的检测，可以了解细胞的功能，为某些疾病的发病机理提供一些理论依据。