岩藻多糖显影剂
选择合适的显影剂是首要任务。一般常用的溶剂按极性从小到大的顺序排列:油扇
展开剂的比例取决于试验。一般根据文献报道的这类化合物用什么样的展开剂，先尝试使用这类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到分离效果好的展开剂。显影剂的选择条件:①对所需组分有良好的溶解性；②能分离成分；③待测组分的Rf在0.2 ~ 0.8之间，定量测定在0.3 ~ 0.5之间；(4)不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，粘度低；⑥展开后，组分斑点圆而集中；⑦混合溶剂最好是新鲜配制的。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，然后根据需要加入甲醇、乙醇和乙酸乙酯，调节溶剂体系的极性，达到良好的分离效果，适用于生物碱、黄酮类和萜类化合物的分离。中极性溶剂体系由氯仿和水组成，由甲醇、乙醇和乙酸乙酯调节，适用于极性较高的蒽醌、香豆素、木脂素和萜类化合物的分离。由正丁醇和水组成的强极性溶剂也受甲醇、乙醇和乙酸乙酯的调节，适用于分离极性较大的生物碱。
很多时候，显影剂的选择取决于改变显影剂的成分以达到最佳效果。在我们的实验中，为了将一个配体与其他杂质有效分离，我们尝试了多种溶剂组合，最终找到了石油醚-etoac-HCOOH (5.5: 3.5: 0.1)的混合溶剂。一般两种溶剂混合时，使用高极性/低极性体积比为1/3的混合溶剂。如果有分离的迹象，调整比例(或添加第三种溶剂)以达到最佳效果。如果没有分离的迹象(斑点在“拖”)，最好更换溶剂。对于硅胶中易分解的物质，在展开剂中常加入少量的碱性物质如三乙胺、氨水、吡啶等来中和硅胶的酸性。(在选择添加的碱性物质时，还必须考虑到容易从产品中去除，氨水无疑是更好的选择。分离效果与硅胶和所用溶剂的质量密切相关:不同厂家生产的硅胶可能含水量、颗粒粗细、酸度不同，导致一个厂家的硅胶分离效果好，而另一个厂家的硅胶分离效果不好。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果有明显的影响。温度和湿度对分离效果也有明显的影响。我们在实验中发现，有时候在相同的膨胀条件下，上午和下午的Rf是完全不同的。
展开剂的选择主要依据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性。
进行薄层色谱分析时，首先要知道未知化学成分的种类及其极性的大致归属。从提取液的极性或色谱柱的流动相，我们可以知道另一个样品中的多种化学成分是根据其极性粗略划分的，然后再细分。对于未知化学物质的分离，展开剂的选择也是一个摸索的过程，不能只从展开剂考虑，还要多种因素综合衡量！
溶剂:色谱中溶剂的选择对组分的分离有很大的影响。柱色谱中使用的溶剂(单剂或混合溶剂)习惯上称为洗脱剂，在薄层或纸色谱中使用时常称为展开剂。应根据被分离物质的组合和所选吸附剂的性质来考虑洗脱剂的选择。当分离的物质是弱极性物质时，通常选择弱极性溶剂作为洗脱剂。如果分离的物质是强极性组分，必须选择极性溶剂作为洗脱剂。如果对极性物质使用弱吸附的吸附剂(如硅藻土或滑石粉代替硅胶)，洗脱液的极性也必须相应降低。
在柱层操作中，可通过该方法加入分离的样品，或选择合适的溶剂溶解样品后加入。用于溶解样品的溶剂应具有较低的极性，以便分离出的成分可以被吸附。然后逐渐增加溶剂的极性。这种极性增加是一个非常缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在色谱柱上的组分被逐一洗脱。如果极性增加太多(梯度太大)，则不能获得满意的分离。溶剂的洗脱能力有时可以用溶剂的介电常数(ε)来表示。介电常数越高，洗脱能力越强。上述洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶和氧化铝。对于非极性吸附剂，如活性炭，顺序正好相反，在水或亲水性溶剂中形成的吸附作用强于脂溶性溶剂。
3.被分离物的性质:被分离物、吸附剂和洗脱液构成了吸附色谱中的三个要素，它们之间有着密切的联系。在特定的吸附剂和洗脱剂条件下，各组分的分离与被分离物质的结构和性质直接相关。对于极性吸附剂，组分极性大，吸附性强。
当然，中草药成分的整体分子观很重要。比如极性基团越多，吸附能越大，同系物中碳原子越少，吸附越强。简而言之，只要两种成分存在结构上的差异，就有可能分离，关键在于条件的选择。应该根据被分离物质的性质、吸附剂的吸附强度和溶剂的性质之间的关系来考虑。首先考虑被分离物质的极性。如果被分离的物质极性很小，是不含氧的萜烯，或者含有氧但非极性基团，就要选择吸附性强的吸附剂，用石油醚或苯等弱极性溶剂洗脱。而中药成分大多极性较大，需要选择吸附性能较弱的吸附剂(一般为ⅲ~ⅳ级)。所用洗脱剂的极性要按一定的梯度由小到大，或用薄层色谱法判断被分离物质在溶剂体系中的分离情况。此外，能否获得满意的分离也与选择的溶剂梯度密切相关。举例说明了吸附色谱中吸附剂、洗脱剂和样品极性之间的关系。如果有多组分混合物，如植物油和脂肪，则由烷烃、烯烃、醇酯、三醋精醋和脂肪酸组成。以硅胶为吸附剂时，选择一系列混合溶剂对吸附后的油进行洗脱，油中各单一组分可根据其极性依次洗脱。
再如C-27甾体皂甙元可按字中羟基数分离:将混合皂甙元溶于含5%氯仿的苯中，加入氧化铝吸附柱，用下列溶剂梯度洗脱。如果用吸附性弱的硅酸镁代替氧化铝，由于硅酸镁吸附性弱，洗脱液的极性要相应降低，即可以用苯或含5%氯仿的苯从吸附剂上洗脱单羟基皂苷元。这个例子说明了当相同的中草药成分在不同的吸附剂中进行色谱分离时，需要不同的溶剂才能达到相同的分离效果，从而说明了吸附剂、溶剂和待分离成分之间的关系。
(2)薄层色谱法:薄层色谱法是一种简单、快速、微量的色谱方法。一般将柱层析的吸附剂铺在玻璃片等平面上形成薄层，称为薄层层析。其原理与柱色谱法基本相似。
1.薄层色谱的特点:薄层色谱和柱色谱在应用和操作上的比较。
2.吸附剂的选择:薄层色谱吸附剂的选择原则与柱色谱相同。主要区别在于TLC要求吸附剂(支撑剂)的粒径更细，一般小于250目，粒径要均匀。薄层色谱所用的吸附剂或预制薄层的活性一般不要太高，ⅱ~ⅲ级为宜。扩散距离取决于薄层的颗粒大小。薄层粒径越细，展开距离越短，一般小于10 cm，否则可能造成色谱扩散，影响分离效果。''
3.展开剂的选择:TLC，当吸附剂的活性达到一定值(如ⅱ级或ⅲ级)时，多组分样品的满意分离取决于展开剂的选择。在脂溶性成分中，中草药的化学成分按极性大致可分为非极性、弱极性、中极性和强极性。但在实际工作中，往往需要利用溶剂的极性来调节显影剂的极性。