中药指纹图谱的构建方法
1薄层色谱法具有选择范围广、重现性好的优点，常用于鉴别中药的各种成分。将每个斑点用固定波长展开的薄层扫描图做出来，比目测做色谱图更客观准确，因此具有更好的指纹识别意义。但由于薄层板质量、开放式色谱系统等外界因素的影响，容易造成一定的实验误差。
气相色谱(GC)气相色谱是一种封闭色谱，具有高效、高选择性和高灵敏度的优点，适用于药材及制剂中挥发性成分的指纹图谱研究。通常使用质量检测器-氢火焰离子化检测器(FID)。钱浩泉等[5]用气相色谱法建立了高良姜及其边缘植物挥发油成分的指纹图谱。在具体应用中，常与质谱联用，既有气相色谱的高分离效率，又有质谱鉴定的高灵敏度和准确度。
3高效液相色谱(HPLC) HPLC具有分离效率高、分析速度快、定量精度高、检测器种类多、稳定性好等特点。不受样品挥发性和热稳定性的限制，比气相色谱应用范围更广，样品中的大部分成分都可以用高效液相色谱进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。由于中药成分的复杂性，一般采用梯度洗脱来构建指纹图谱，因为逐步提高流动相的洗脱能力可以获得更多的色谱峰，提供更多的指纹信息。在调查条件时，既要考虑指数成分，也要考虑非指数成分。由于药材中各种成分的吸收波长和对不同检测器的响应不同，因此在构建指纹图谱时也需要考虑。在实际应用中，采用多种组合技术，充分利用各检测器的互补性，从不同角度反映药材及制剂的全貌，从各种图谱中获取结构信息。
高速逆流色谱(HSCCC)是国际上较新的液-液分配色谱技术，它利用两种互不相溶的溶剂相对运动，在动态平衡中分离两相中不同分配比的组分。据报道[6]，高速逆流色谱已应用于生物碱、类黄酮、木脂素、蒽醌和其他天然产物的分离和分析。它具有分离效率高、溶剂用量少、无吸附、样品回收率高、重现性好、适用范围广等优点。
5高效毛细管电泳(HPCE)高效毛细管电泳(HPCE)是一种由高压电场驱动，利用毛细管作为分离通道，根据样品中各组分的流动性和分布行为的差异，实现高效、快速分离的新型电泳技术。毛细管电泳的广泛应用取决于其多变的分离模式，几乎涉及分析化学中所有的分离对象，从无机离子到蛋白质和聚合物，还可以分析不带电荷的中性物质[7]。它具有样品少、溶剂用量少、抗污染能力强、可直接分析水溶液等优点。毛细管区带电泳(CZE)和胶束电动毛细管电泳色谱(MECC)是中草药分析中最常见的两种模式。然而，该方法的重现性需要改进。
6紫外-可见光谱(UV)紫外-可见光谱反映了不同化学物质的电子* * *共轭体系的特征，具有加和性，对混合物的鉴别特异性差，分辨率低，所以很少使用UV光谱进行指纹图谱的构建。
7红外光谱和近红外光谱(IR)红外光谱是由分子的振动-转动能级跃迁产生的，红外光谱具有很强的特征性。近红外光谱技术在中药质量控制中具有良好的应用前景。
8核磁共振(NMR)结构信息可以从纯有机化合物的核磁共振谱中获得，包括各种质子的化学位移和定量-核偶联关系。核磁共振波谱具有很高的重现性和特征性，易于分析和进一步研究，可以评价药材和中成药质量的均一性和稳定性。
9质谱(MS)中药提取物中的化学成分可以在质谱仪中通过电子轰击电离得到。不同的中药提取物含有不同的成分，得到的质谱图显示出不同的分子离子峰和进一步的碎裂峰，可用于鉴别。
10 X射线衍射法被X射线照射的物质会产生不同程度的衍射现象。只要混合物的成分不变，其衍射图样就可以作为混合物的特征图样。该方法具有指纹特异性强、信息量大、样本量小等优点。x射线衍射法在动物药材的鉴定和鉴别中具有独特的优势[8]。
11分子生物学方法(DNA)是利用聚合酶链式反应，从不同的生物样本中人工合成DNA片段，这种DNA片段的大小和数量可以随不同的生物而变化，所以称为DNA指纹图谱。该技术具有重复性好、灵敏度高的优点。限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)是构建DNA指纹图谱最常用的方法，但这种方法费时费力，应用受到限制。随机扩增多态性DNA(RAPD)标记可以在特定DNA序列不明确的情况下检测DNA的多态性，是构建中药指纹图谱的一种新方法，具有良好的应用前景。罗志勇等人[9]利用RFLP技术分析了人参和西洋参的DNA指纹图谱。