白屈菜的鉴定。
叶表面观:上表皮细胞垂壁平直;下表皮细胞的垂直周壁呈波浪状;下面有更多更长的静脉。非腺毛有3-13个细胞,长150-1500μm。
茎横切面:1排表皮细胞;外层是波状角质层。皮层外有两排含叶绿体的上皮细胞,下部3-4排细胞壁略厚。(1)化学表征取5g粗粉,用20ml氨化氯仿浸泡过夜,过滤。将氯仿溶液分成两份,一份留作薄层取样,另一份挥发氯仿,溶于2ml 1%盐酸中,置于试管中,滴加改进的碘化铋钾试液,溶液立即产生红棕色沉淀。(生物碱反应)
(2)薄层色谱样品的制备:同“化学表征”。或者,可将“化学性状”项中氯仿提取的残渣充分挥发后,用甲醇浸泡过夜,过滤,滤液浓缩至2ml,点于硅胶G薄层板上(青岛产,用0。5%氢氧化钠溶液并在65438±020℃烘烤4小时以上)。氯仿浸出部分用己烷-氯仿-甲醇(6: 3: 0.3)展开或甲醇浸出部分用氯仿-甲醇(9: 1)展开,氨蒸气饱和,展开10cm。以白屈菜碱、四氢黄连碱、白屈菜红碱和血根碱为对照,在紫外光(254 ~ 365 nm)下观察。结果,白屈菜根提取物中检测到了所有四种生物碱,而地上部分提取物中未检测到白屈菜红碱。甲醇提取物与黄连素、黄连碱进行了比较,改进了碘化铋钾试剂的喷雾。结果,在白屈菜根提取物中检测到两种生物碱,而在地上提取物中仅检测到黄连碱。
(3)纸层析取粉末0.1g,用1%柠檬酸溶液饱和的丁醇10ml浸泡1小时,不时摇动,过滤,1小时后用水饱和正丁醇饱和滤纸铺滤30-45分钟,取出,干燥后紫外灯下观察。
(4)含量测定①白屈菜碱的测定:先用硫酸的甲醇溶液比色法提取样品,提取液蒸去甲醇后,用氢氧化钠溶液中和酸性溶液成碱性,用氯仿萃取,再酸化,用氯仿萃取,再用氢氧化钠溶液碱化,蒸去氯仿,残渣溶于甲醇,定容。将一定量的该溶液点在用丙酮-甲酰胺(7: 3)预处理过的滤纸上,用正丁醇-乙酸-水(4: 1: 5)展开,用含金莲花的pH4乙酸缓冲液洗脱分离出的白屈菜斑点,然后用氯仿提取有色化合物(白屈菜碱和染料的混合物)。
(5)用氯仿-油酸(99: 1)紫外分光光度法提取粉末,将浓缩液点于硅胶G薄层板上,以氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲苯(2: 1: 1: 1)展开,然后从薄层板上挖出白屈菜斑点。
(6)碘量法:将3g粉末与30g 70%乙醇在室温下摇匀2小时,过滤,取25g滤液,蒸发乙醇,加入10%硫酸溶液10滴,加水至10g,过滤,取5g滤液,用1ml 10%氢氧化铵溶液碱化。用棉花过滤,将20g蒸发残渣溶于0.1N硫酸溶液中,加热除去氯仿,用0.1N硫酸溶液稀释至10ml,取一定量该溶液(相当于0.5g样品),与2ml 10%硫酸溶液和2ml 0.1N碘-碘化钾溶液混合,静置。溶于25ml(ⅰ)甲醇中,用0.01N硫代硫酸钠标准溶液滴定(1ml 0。01N硫代硫酸钠≈ 0.882 5mg白屈菜碱)。也可以在470nm处测定(I)溶液的吸光度。该方法灵敏,样品中其他生物碱不干扰。
(7)酸碱滴定:取样品用70%乙醇提取,浓缩,用硫酸酸化,过滤,用15%氢氧化钠溶液碱化,用氯仿萃取,浓缩后向萃取液中加入一定量的0.1N盐酸溶液,水浴加热除去氯仿,然后用0.1N氢氧化钠溶液滴定,以甲基红-甲基蓝混合液为指示剂。
(8)血根碱含量的测定(比色法):将含血根碱样品的石油醚溶液用盐酸提取,然后用碱碱化并用氯仿提取,再加入30%三氯化锑氯仿溶液,形成橙色,然后比较颜色。方法:取一定量的样品石油醚提取物,置于分液漏斗中,加入浓盐酸10ml,充分摇匀后加入蒸馏水10ml,分离酸层,转移至另一分液漏斗中,用含1 ~ 2滴浓盐酸的蒸馏水10ml萃取石油醚层两次,合并酸溶液与1。冷却后,用氯仿萃取三次(10,10,5ml),在小烧杯中合并氯仿溶液,在100℃烘箱中蒸发干燥,将残渣定量移至装有3ml干氯仿的比色管中,加入2ml 30%三氯化锑的干氯仿溶液,用绿色滤光片比色。
(9)总生物碱的测定:取5g样品,用60%乙醇提取三次(100,100,50ml),每次加热15min,合并提取液,减压浓缩至50ml,加入30ml浓硫酸、30ml醋酸溶液和4g锌粒,加热约65438+。冷却后,用浓氨水中和,用乙醚萃取三次(直至萃取液不与碘化钾汞试剂反应),过滤,用无水硫酸钠干燥,用乙醚洗涤过滤器,浓缩,抽空干燥除去乙醚,并干燥至恒重,准确加入50毫升氯仿溶解,吸取25毫升氯仿溶液,蒸干,将残渣溶于65438±00毫升冰醋酸中,加入5毫升0.65438±0N乙酸酐。总生物碱含量以白屈菜碱计(1ml 0.05N高氯酸溶液≈ 0.017 65g白屈菜碱)。