高效液相色谱法测定白芍中芍药苷的色谱条件如何选择？

Bio Focus 3000毛细管电泳仪(美国Bio Rad公司)；熔融应时毛细管柱(无涂层)501μm×50cm(有效分离k度45.5cm，河北永年光纤厂)；微孔膜(0.45微米)和过滤装置(美国密理博)；Milli-Qplus(美国)芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)；药材(医院中药房提供)；八珍丸(水蜜丸)和八珍木易丸(水蜜丸)(市售产品)的甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2方法和结果

2.1测定条件:运行缓冲液:50 mmol/L硼砂缓冲液，用氢氧化钠调节pH至10.6；工作电压:20KV，极性从正到负；检测波长:230nm；柱温:20℃；采用压力进样，压力进样常数为10 psi× s，运行缓冲液和样品溶液均经过0.45微米微孔滤膜过滤，然后采用毛细管冲洗法:每次启动用超纯水冲洗3min，然后用0.1mo1/L氢氧化钠冲洗3次，再用超纯水冲洗3min，再用运行缓冲液冲洗3min。每次测定之间用运行缓冲液冲洗1分钟。

2.2对照溶液的制备和测定:准确称取芍药苷10.0 mg，在五氧化二磷真空干燥器中干燥36小时，用甲醇制成浓度为1.0 mg/ml的对照储备液。取500μ1储备液，置于lml容量瓶中，加入运行缓冲液至刻度，取样测定。

2.3供试品溶液的制备和测定:按《中国药典》(2000年版)中“八珍丸含量测定”项下供试品溶液的制备方法，制备八珍丸和八珍木易丸，用流动缓冲液稀释至适当浓度，注射，测定。

阴性对照溶液:按处方比例和生产制备方法制备不含白芍的八珍L丸和八珍木易丸空白样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，进样测定。

2.4标准曲线的制备:分别取芍药苷储备液62.5 μ l，125，250，500 μ l，1 000μl，用超纯水定容至1ml。依次注射后，用药物浓度(c)与峰面积迁移时间的比值(x)进行回归，回归方程为:c =-60。线性范围为0.0625 ~ 1.0 mg/ml。

2.5精密度试验:取浓度为0.25mg/ml的对照溶液，日内和日间重复进样5次，测量峰面积与迁移时间的比值，计算精密度。日内RSD为1.61%；日相对标准偏差为3.15%。

2.6样品回收试验:在已知浓度的八珍丸和八珍木易丸样品溶液中加入适量芍药苷对照品溶液，进行样品分析，测定含量。回收率结果见表12.7样品含量测定:采用高效液相色谱法测定八珍丸和八珍木易丸的含量，同时参照《中国药典》(2000年版)中“八珍丸”进行含量测定。

3讨论

实验研究了pH8-11的缓冲液。结果表明，当pH值大于9.0时，芍药苷可以分离，且得到的峰形良好。当pH小于9.0时，芍药苷的峰变形不良，迁移时间延长，因此最终确定最佳pH为10.6。在此条件下，芍药苷能得到很好的分离，峰形良好，迁移时间适中。作者考察了硼砂浓度在25 ~ 100 mmol/L范围内，发现随着浓度的增加，分离度增加，但同时电流也增加。

从本实验的分析结果可以看出，HPCE法对八珍丸和八珍木易丸中芍药苷的定量测定准确有效，HPCE法对八珍丸的测定结果与高效液相色谱法的测定结果基本一致。然而，与高效液相色谱法相比，HPCE法具有高效、快速、样品体积小、溶剂用量少、抗污染能力强等特点。《中国药典》(2 000年版)(第一部)采用HPLC法作为八珍丸中芍药苷的定量方法，所需理论板数不少于2000，但本实验所用理论板数可达100 000以上，分离效率大大提高。方法学考察结果令人满意，该方法精密度高、稳定性好、重现性好。

本实验结果无疑为八珍丸和八珍木易丸中芍药苷的定量分析提供了一种新的方法。也可为同类中成药的质量控制提供参考。