如何测定阿司匹林的含量？

阿司匹林片是常用的解热镇痛药，中国药典2000年版有记载。用酸碱中和滴定法测定原始含量。目前市面上流通的解热镇痛药很多，都含有阿司匹林或者主要服用阿司匹林。除了中国药典原有的含量测定方法外，各剂型还有各种含量测定方法。若用高效液相色谱法测定含量，可排除其他含酸、碱物质的干扰，更有效地控制制剂的质量。该方法简便、特异、准确。还有数学模型进行计算，如近红外漫反射技术，其原理是根据标准样品集中样品的近红外光谱，通过化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测组分之间的数学关系(简称数学模型)。

1.阿司匹林和阿司匹林制剂的测定

阿司匹林及阿司匹林制剂的含量测定方法很多，包括药典中的酸碱中和滴定法。

和紫外分光光度法、高效液相色谱法等。

1.1阿司匹林酸碱滴定法；

直接滴定法:方法:取0。4g，准确称取，加入20ml中性乙醇，溶解，加入酚酞指示液3天，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/l)滴定。每1毫升滴定剂相当于18。02毫克C9H8O4

水解后残留滴定:方法:取1.5g本品，准确称取50.0ml氢氧化钠滴定溶液(0.5mol/L)，混匀，缓慢煮沸10min，冷却，加入酚酞指示液，用硫酸滴定溶液(0.25mol/l)滴定剩余的氢氧化钠。

两步滴定法:取本品10片，准确称取并研磨，准确称取适量片剂粉末(约相当于阿司匹林)，加入20ml中性乙醇，摇匀使阿司匹林溶解，加入酚酞指示剂3天，滴加氢氧化钠滴定溶液(0.1mol/l)，至溶液变为粉红色。加入定量过量的40 ml氢氧化钠滴定溶液(0.1 mol/L)，水浴加热1.5 min并不时摇动，迅速冷却至室温，用硫酸滴定溶液(0.05mol/l)滴定剩余的碱。根据消耗的滴定剂体积和滴定度计算含量。

电极法测定1.2阿司匹林制剂

仪器和试剂:pHs—loC数字酸度离子计用于测试电极电位和溶液酸度；参比电极为232饱和甘汞电极；试剂是分析纯的，实验用水是用高锰酸钾处理过的去离子水。

电极的制备:将0.33g载体材料辛酸三苄基锡20mgl聚氯乙烯(PVC)和o.65g增塑剂邻硝基苯辛基醚溶于3g四氢呋喃(THF)中，搅拌澄清，然后倒在40 mm×40 mm的水平玻璃板上，待THF挥发后(约2小时)，即可得到弹性PVC膜。用打孔器切下一个直径为10 mm的圆盘，用含5% PVC的THF溶液粘在PVC电极棒的末端，放置数小时。干燥后，在电极棒中注入0.1 mol/L水杨酸钠溶液作为内参比溶液，并引出至离子计，以Ag/AgCl丝作为内参比电极。使用前，电极应浸泡在0.01mol/l/L水杨酸钠溶液中2小时进行活化。电极和备用膜可在长期不使用后清洗，并储存在氮气环境中。在此条件下，电极的性能指标可保持稳定至少5个月。

阿司匹林制剂的分析:待测样品的处理:阿司匹林容易水解得到水杨酸根离子，反应是定量的。因此，样品中阿司匹林的含量可以通过水杨酸根离子的测定来获得。阿司匹林片(a)和复方阿司匹林片(b)的处理如下:将适量药物(10片)制成粉末，精确称取1-1.5g，在0.5mol/L NaOH溶液中加热回流1h，然后过滤。吸取lOm1的滤液，用稀硫酸调至pH 5.5，再用pH 5.5的磷酸盐缓冲液调至体积为100 mI作为待洗溶液。利用该电极，分别用标准溶液法和样品加入法测定药物A和B样品中水杨酸根离子的浓度，换算得到药物中阿司匹林的含量。

1.3高效液相色谱法测定阿司匹林片剂的含量

仪器及药物检测仪器:高效液相色谱仪；LC级工作站。色谱柱:ODS C18色谱柱(150mm x 4.6mm，填料:Kromasil，粒径:5um)。试试阿司匹林对照品、甲醇(色谱纯试剂)、冰醋酸、盐酸(分析纯试剂)。

取本品20片，准确称取，研磨，准确称取适量(约相当于阿司匹林10mg)，置于100m1量瓶中，加入0.1 mol/L盐酸溶液适量，超声溶解阿司匹林，冷却至室温，加入0.1 mol/L，置于25m1容量瓶中，加入0.655取阿司匹林对照品适量，加0.1 mol/L盐酸溶液溶解稀释，制成每l m1含阿司匹林约20ul的溶液，取20ul，同法测定。根据外标法，计算峰面积。

1.4动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸

原理:碘对Ce4+和as的氧化还原反应有明显的催化作用。乙酰水杨酸与碘易发生取代反应，降低碘的浓度，削弱碘的催化作用。因此，建立了动力学分光光度法测定痕量二乙基水杨酸的新方法。

仪器和试剂:721分光光度计；PHS-3C pH计；超级恒温水浴。0.01mol/lce(SO4)20.013mol/l as2o 3，5mol/l H2SO4，5mg/l KI稀释至0.25mg/l；150mg/l乙酰水杨酸标准溶液及时稀释至所需浓度；5%醋酸马钱子碱；实验用水是二次蒸馏水。

实验方法:将0.25mg/lKI溶液1，5mol/L h2so 4溶液1，0.01，0.013mol/L As2O3溶液1加入一系列25m1比色管中。摇匀后放入35土0.1度的水浴中。恒温后，加入0.01mol/l Ce[S04]2 1.0ml，立即摇匀，迅速放回水浴中。反应65438±00分钟后，加入0.5 mol/L和0.5%醋酸马钱子碱终止反应，与Ce4+显色，放入沸水浴中煮沸3min，取出冷却至室温。使用1cm比色皿，在520nm的波长下，以蒸馏水作为参比，测定吸光度A。

2.主药阿司匹林的确定。

虽然其成分不同，但大部分还是根据阿司匹林的化学或色谱性质进行分离测定的。

2.1反相高效液相色谱法测定阿司匹林可待因片中阿司匹林的含量

仪器和试剂:Hp-1050液相色谱仪和紫外检测器，HP3396积分仪。磷酸可待因对照品，阿司匹林对照品。甲醇、醋酸钠、冰醋酸均为分析纯试剂，阿司匹林、磷酸可待因复方制剂(试制品)。

液相色谱条件:色谱柱ODS C18(10mm，300mm×4mm)流动相:甲醇-0.03 mol/L-L乙酸钠(用冰醋酸调至pH 3.5)(1:2.5)；检测波长:280nm；流量:1毫升/分钟。

测定方法

配制混合对照溶液，准确称取适量磷酸可待因对照品，在65438±005℃干燥至恒重。溶于水，配制成浓度为0.8 mol/L的溶液，准确称取约40ml阿司匹林对照品，置于10mL容量瓶中。加入2-3 ml甲醇，溶解，准确加入1.0mL上述磷酸可待因溶液，用水定容至刻度，摇匀，即得。

准确称取适量样品f5mine粉末(约8mg磷酸可待因和400mg阿司匹林)制备供试品溶液，置于100mL容量瓶中，加入50ml 25%甲醇溶液，超声溶解5分钟。用25%甲醇溶液稀释至刻度，并均匀网格化。用0.45um微孔滤膜过滤，取连续滤液作为供试品溶液。

准确吸取混合对照溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪。记录峰面积。根据混合对照溶液中磷酸可待因和阿司匹林的峰面积，计算出供试品溶液中磷酸可待因和阿司匹林的含量。

2.2紫外转换光谱法测定小儿退热灵片的含量

原理:曲线分析是一种数学变换方法(其数学属性是一种新的复合导数变换)。根据谐波分析原理，将光谱吸收曲线视为多个数学成分的加权。由于它提供了大量的信息，可以显示吸收曲线的细微差异，以减少相似组分的数学相关性，因此在物质定性和混合物定量方面具有明显的优势。

仪器和试剂:UV/VISW裙边光谱仪和裙边光谱仪软件；阿司匹林(1)对照品(99.89%)、苯巴比妥(2)对照品(99.92%)和辅料(佳木斯化学制药厂)；小儿退热灵片

方法与结果:对照品溶液的制备:分别精密称取1和2种对照品各适量，用0.1 mol/L NaOH溶液(溶剂)稀释，制成1 mg/m 1储备溶液。用溶剂稀释，制成适当浓度的溶液(约120ug/M1，22.0ug/M1，使1和2的吸光度为0.2-0.8)。模拟样品的制备按原黑龙江地方标准药品处方比例，称取1，2，与适量辅料混合，精确称取0.2g，置于小烧杯中，用溶剂溶解定容至100m1，静置10min，再取5m1稀释至250m1。分别吸取16、17、18、19和20m1，置于25m1容量瓶中，用溶剂定容，得到20-25ug/m 1和2的1浓度。

样品测定:取本品12片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于10.110g，20.011g)，用少量溶剂溶解，定容至50m1。根据“2.3”项下方法选择的最佳转换区间(245-295 nm)，通过转换光谱自动采集该区间的光谱信息，由双组分定量分析系统软件进行裙边操作，计算出含量。

2.3通过近红外漫反射技术测定精氨酸阿司匹林

原理:近红外定量分析需要一个待测成分已知的标准样本集(简称标准样本集)。根据标准样品集中样品的近红外光谱，通过化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测组分之间的数学关系(简称数学模型)。当测定未知样品时，只需测定样品的近红外光谱，然后通过建立的数学模型预测待测组分的含量。与常规光谱定量分析不同，近红外光谱分析中使用的样品无需预处理，通过求解待测组分的光谱矩阵和浓度矩阵即可定量。漫反射技术一般用于检测固体样品，透射法用于检测液体样品。建立数学模型的方法主要有:多元线性回归、主成分法、偏最小二乘法等。粘贴算法是一种相对较新的多元数据处理技术，它与逐步回归和主成分回归的显著区别在于，它考虑了整个光谱区域内所有波长的光谱参数以及被分析样品中各组分之间的关系，因此被广泛应用于近红外分析中。

仪器:布鲁克公司VECTOR22/N近红外光谱仪，漫反射光纤探头波长范围4000-11000cm-1。

样品:精氨酸阿司匹林固体粉末含阿司匹林48.0%-53.0%，蔗糖酯(片剂辅料为润滑剂)。

实验方法:分别用1/100份扭秤准确称取不同比例的精氨酸阿司匹林和蔗糖酯(* * * 100份)，混合均匀，用压片机压片，得到不同精氨酸阿司匹林含量的片剂(以此含量作为精氨酸阿司匹林片剂理论含量的真值)，每片100片。从每100片中随机选取10片，用仪器的漫反射光纤探头按压，在每片的两面测量1次，取平均光谱作为样品光谱。扫描间隔为4000-11000cm-1，分辨率为8cm-1。利用Bruker公司的quant/2软件对光谱数据进行分析，通过加性散射校正对光谱数据进行预处理，消除不同药片表面带来的误差，从而得到测量值。

2.4阿司匹林精氨酸注射液的含量测定

仪器和试剂测试:仪器79-L电磁搅拌器；紫外-可见分光光度计。精氨酸、阿司匹林等试剂为分析纯。

标准曲线的绘制:准确称取250.0 mg阿司匹林晶体，悬浮于250mL蒸馏水中，在40-50度水浴中搅拌至溶解，冷却，移入500 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。分别准确吸取L、2、3、4和5mL，置于50 mL容量瓶中，加入25mL蒸馏水，用0.1mol/l NaOH溶液调节pH至9-10，在沸水浴中加热5min，冷却，用0.1mol/L盐酸溶液调节pH至3.0-4.0，加入5滴硫酸铁。在530纳米的波长下测量吸光度a。线性回归方程。

含量测定:准确称取阿司匹林精氨酸盐400.0 mg，置于l00mL容量瓶中，加蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀，过滤。取5mL连续滤液，置于50 mL容量瓶中，沸水浴加热数分钟，冷却，加入25mL蒸馏水，在同一标准曲线下处理，在530 nm波长处测定吸光度a，计算阿司匹林精氨酸盐的含量。阿司匹林精氨酸盐含量=(实测值/称量值)×100%，代入数据得到阿司匹林精氨酸盐的含量。

3.阿司匹林的体内分析:

3.1反相高效液相色谱法测定阿司匹林血浆浓度

1仪器和试剂:Waters2690高效液相色谱仪，配备996二极管阵列检测器和千禧数据处理系统；涡流混合器(上海青浦沪西仪器厂)；TGL-16高速离心机(上海医疗器械厂)。水杨酸和苯甲酸对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸是分析纯，乙基眼药水是色谱纯；水是超纯水。

色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6mm×250mm，5um)，流动相为甲基发酵-乙基眼-0.2%磷酸(18: 32: 50)。检测波长为237nm，流速为65438±0.0ml/min。

溶液制备:准确称取10.10 mg水杨酸对照品，用甲基酵母溶解，定容至10ml，得1.010 mg/L水杨酸原液，用甲醇稀释成不同浓度的系列溶液。准确称取10.44mg苯甲酸，用甲基酵母溶解，定容至10ml，得到1.044mg/l/L苯甲酸原液。取lml储备液，用甲醇稀释至10ml，得到104.4 ug/ml内标工作液。

样品处理和测定:准确量取血清样品0.5nl，加入内标苯甲酸溶液(104.4 ug/m 1)50ul，乙基眼2ml，涡旋2min，以15000 r/min离心5min，取上清液20ul，在上述色谱条件下进样，分别记录内标和样品的色谱图。根据外标法，计算峰面积。

讨论

阿司匹林及其制剂的分析方法很多，但也有一些相似之处。HPLC分析中，检测柱一般为C18柱，检测波长约为280。滴定是根据药物中游离羧酸的酸度，或者水解后用酸回滴。其他通过数学模型进行的测量也是基于阿司匹林的化学结构和性质。

参考资料:

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